双人源化小鼠的基因功能简介
4-1BB基因功能简介
TNFRSF9（TNF receptor superfamily member 9）为TNF受体超家族成员，也称为CD137或4-1BB，主要表达在活化的T细胞、NK细胞、单核细胞表面。通过连接其配体CD137L或利用激活型CD137单克隆抗体激活CD137，既能提供共刺激信号激活T细胞，使T细胞活化增殖并分泌细胞因子，同时它介导的共刺激信号能够诱导抗原提呈细胞增殖并分泌细胞因子。许多实验表明干预CD137共刺激途经可以调节T细胞和抗原提呈细胞的功能产生抗肿瘤免疫作用，为肿瘤免疫治疗提供了新的靶点。
基本信息
打靶策略
表型分析
B-hPD-1/h4-1BB小鼠蛋白表达分析
结果显示：在C57BL/6小鼠中可检测到m4-1BB+细胞。在B-hPD-1/h4-1BB纯合鼠中，可检测到h4-1BB+细胞。
结果显示：在C57BL/6小鼠中可检测到mPD-1+细胞。在B-hPD-1/h4-1BB纯合鼠中，可检测到hPD-1+细胞。
脾脏免疫细胞分型
流式细胞术检测野生型C57BL/6小鼠和B-hPD-1/h4-1BB小鼠(n=3)脾脏中免疫细胞分型，结果显示：纯合B-hPD-1/h4-1BB小鼠免疫细胞分型与野生型小鼠相似。说明其T、B、NK、DC、粒细胞、单核细胞、巨噬细胞的分化未受到PD-1和4-1BB基因人源化的影响。
脾脏T细胞分型
流式细胞术检测野生型C57BL/6小鼠和B-hPD-1/h4-1BB小鼠（n=3）脾脏淋巴细胞中的T细胞亚群比例。结果显示：纯合B-hPD-1/h4-1BB小鼠与野生型C57BL/6小鼠淋巴细胞亚群有相似分布，说明其T细胞分化未受到PD-1和4-1BB基因人源化的影响。
血液免疫细胞分型
流式细胞术检测野生型C57BL/6小鼠和B-hPD-1/h4-1BB小鼠(n=3)血液免疫细胞分型，结果显示：纯合B-hPD-1/h4-1BB小鼠免疫细胞分型与野生型小鼠相似。说明其T、B、NK、DC、粒细胞、单核细胞、巨噬细胞的分化未受到PD-1和4-1BB基因人源化的影响。
血液T细胞分型
流式细胞术检测野生型C57BL/6小鼠和B-hPD-1/h4-1BB小鼠（n=3）血液淋巴细胞中的T细胞亚群比例。结果显示：纯合B-hPD-1/h4-1BB小鼠与野生型C57BL/6小鼠淋巴细胞亚群有相似分布，说明其T细胞分化未受到PD-1和4-1BB基因人源化的影响。
血常规检测
血常规检测野生型C57BL/6小鼠和B-hPD-1/h4-1BB小鼠（n=3）。结果显示：纯合B-hPD-1/h4-1BB小鼠与野生型C57BL/6小鼠血常规检测值相似。
血生化检测
血生化检测野生型C57BL/6小鼠和B-hPD-1/h4-1BB小鼠（n=3）。结果显示：纯合B-hPD-1/h4-1BB小鼠与野生型C57BL/6小鼠血常规检测值相似。
抗体药效验证
1、基于小鼠结肠癌的肿瘤模型
将小鼠结肠癌细胞MC38移植到B-hPD-1/h4-1BB纯合小鼠皮下，待肿瘤体积约150±50mm3时将动物入组至对照组和治疗组(n=6) 。
结果显示：联合应用抗人PD-1抗体Keytruda和抗人4-1BB抗体Urelumab 对肿瘤生长的抑制作用强于分别单用两种抗体药的药效。A. 肿瘤平均体积±SEM，B. 小鼠平均体重±SEM。结果证明：B-hPD-1/h4-1BB纯小鼠是评估联合应用人PD-1和人4-1BB抗体体内药效的有力工具。
2、基于小鼠黑色素瘤的肿瘤模型
结果显示：联合应用抗人PD-1抗体Keytruda和抗人4-1BB抗体Urelumab 对肿瘤生长的抑制作用强于分别单用两种抗体药的药效。A. 肿瘤平均体积±SEM，B. 小鼠平均体重±SEM。结果证明：B-hPD-1/h4-1BB纯小鼠是评估联合应用人PD-1和人4-1BB抗体体内药效的有力工具。
3、基于小鼠淋巴瘤的肿瘤模型
结果显示：联合应用抗人PD-1抗体Keytruda和抗人4-1BB抗体Urelumab 对肿瘤生长的抑制作用强于分别单用两种抗体药的药效。A. 肿瘤平均体积±SEM，B. 小鼠平均体重±SEM。结果证明：B-hPD-1/h4-1BB纯小鼠是评估联合应用人PD-1和人4-1BB抗体体内药效的有力工具。
参考资料
Gonzalez, P.A., et al. Modulation of tumor immunity by soluble and membrane-bound molecules at the immunological synapse. Clin Dev Immunol 2013, 450291 (2013).
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