为什么要使用多重荧光方法进行western blot的检测？

最近关于western blot数据造假的学术新闻成了科研的热搜词条，其数据造假包括，均存在一图多用，用了剪切，拼接，翻转，旋转，调整大小，故意抹平背景等P图手法，那我们来看看这些造假的数据。

一、一图两用——用同一条带，P图后代表不同实验结果。

两个不同实验，同一条带代表不同蛋白（GST-IkBa和Caspase）

《锌指蛋白A20对氧化性低密度脂蛋白介导的巨噬细胞与血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制的研究》，2005年6月

二、抹平背景

为了达到预期的实验效果，故意调整对比度，将不要的条带抹去。

Kagami, A. et al. Acetylation regulates monopolar attachment at multiple levels during meiosis I in fission yeast. EMBO Rep. 12, 1189–1195 (2011).

三、拼图粘贴

ABCD变成了ACBD

--Metformin inhibits cell proliferation, migration and invasion by attenuating CSC function mediated by deregulating miRNAs in pancreatic cancer cells.Cancer Prevention Research (2012）

四、一组对照多次使用

像GAPDH、β-actin这些基本都是阳性的结果，所以有时候有些小伙伴就图省事儿，做一次GAPDH、β-actin的WB图，可以用一阵子，发几篇文章了，有时候调调亮度，有时候增加以下对比度，有的时候镜像反转一下。

--Increased Ras GTPase activity is regulated by miRNAs that can be attenuated by CDF treatment in pancreatic cancer cells.Cancer Letters (2012)

那么我们如何遏制这样造假数据的发生的，最好的办法是选择合适合理的检测方法和提供真实的图片信息。

A、z验人员应该采用现在动态范围更宽的多重荧光western blot检测方法来进行western blot检测，多重荧光检测二抗使用荧光基团标记，膜上的靶标蛋白浓度与荧光信号强度呈线性关系，实现真正的定量要求，无需玻剥离膜和二次孵育，进行上样质控，目标蛋白和内参蛋白在同一张膜上，就不会发生上面数据造假的情况发生。

• 成像仪器要提供给客户真实的原始的tiff图片，而不是经过软件自行修改，编辑的看着好看的图片，例如插值图片，插值图像灰度值有明显的不连续性，图像质量损失较大，会产生明显的马赛克和锯齿现象。自动优化图片，软件类似PS的手法，在形成图像时进行自动优化，消除背景等方法，这样会使图片丢失大量信息，影响数据的真实性。
• Azure公司秉承实事求是，尊重科研的态度，我们提供给客户最原始的16bit的tiff图片，tiff是最复杂的一种位图文件格式。tiff是基于标记的文件格式，它广泛地应用于对图像质量要求较高的图像的存储与转换。由于它的结构灵活和包容性大，它已成为图像文件格式的一种标准。信息量大，真实反映实验结果。

综上所述，要选择合适的western blot检测方法、好的成像检测器和一颗端正的学术心，才能做好科研，不会有类似的事件发生。

Azure C系列多功能成像系统和Azure Sapphire 双模式多光谱激光成像系统为您的实验数据保驾护航。