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使用HUVEC细胞进行血管生成实验,并用LONZA核转仪转染anti-VEGFR2 siRNA

浏览次数:7371 发布日期:2017-10-27  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负
Srinivasan Kokatam1, Kanchan Tiwari1, Jenny Schroeder2, Andrea Toell2, Lubna Hussain3, Preeti Kapoor1.
1. Lonza India Pvt Ltd, Hyderabad, India; 2. Lonza Cologne GmbH, Cologne, Germany; 3. Lonza Walkersville, Inc., Walkersville, MD, U.S.A.
 
实验材料:
英文名
中文名
品牌
货号
single donor CloneticsHUVECs
脐静脉内皮细胞,单一供体
LONZA Clonetics
C2517A
EGM2 Media
血管内皮细胞培养基
LONZA
CC-3162
ViaLightPlus BioAssay Kit
细胞活力检测试剂盒
LONZA
LT07-221
Matrigel
基质胶
Corning
356237
4D Nucleofector
核转仪
LONZA
C+X+96模块
P5 Primary Cell Nucleofector Kit
核转试剂盒
LONZA
V4XP-5024
V4XP-5032
Calcein AM
Life Technologies
C3100MP
VEGFR2 ELISA
VEGFR2ELISA检测试剂盒
R&D Systems
DYC1780-5
 
培养基配方:
 
实验流程简介:
1. 使用pmaxGFP质粒进行进行预实验,优化HUVEC细胞核转条件;
2. 检测核转条件对HUVEC细胞的Tube formation是否有影响;
3. 转染siRNA,确定对细胞活力影响最小的最佳浓度,确定检测蛋白表达降低的最佳时间点;
4. 评价siRNAHUVEC细胞Tube Formation的影响。
 
实验结果:
1. HUVEC细胞转染GFP质粒,转染效率约为82%,对细胞形态无明显影响:
2. HUVEC细胞进行核转后,对Tube formation无明显影响:
3. Anti-VEGFR2 siRNA转染后的细胞对VEGF无反应,证明siRNA发挥作用。
 
 
参考文献:
1. Timar, J. et. al. (2001) Angiogenesis-dependent diseases and angiogenesis therapy. Pathol. Oncol. Res.7 (2): 85-94
2. Murga M1, Fernandez-Capetillo O, Tosato G. (2005) Neuropilin-1 regulates attachment in human endothelial cells independently of vascular endothelial growth factor receptor-2. Blood 105 (5): 1992-9
3. Yang, S, Xin, X, Zlot, C et. al. (2001) Vascular Endothelial Cell Growth Factor-Driven Endothelial Tube Formation Is Mediated by Vascular Endothelial Cell Growth Factor Receptor-2, a Kinase Insert Domain-Containing Receptor. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 21: 1934-1940
4. Zumbansen M, Altrogge L, Toell A, Leake D, Muller-Hartmann H (2009) First siRNA Library Screening in Difficult-to-Transfect HUVEC and Jurkat Cells. White paper.
5. Zeitelhofer M, Vessey JP, Xie Y, Tubing F, Thomas S, Kiebler M, Dahm R (2007) High-efficiency transfection of mammalian neurons via Nucleofection. Nat. Protocols 2: 16921704
6. Kapoor, R., Reddy, V. and Kapoor, P. (2014) Tube Formation Assay with Primary Human Umbilical Vein Endothelial Cells. Resource Notes, 2014: 9-12.
来源:北京泽平科技有限责任公司
联系电话:13521452266
E-mail:service@bjzeping.com

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