动物细胞糖蛋白高碘酸希尔法阿尔新蓝染色试剂盒产品说明书
动物细胞糖蛋白高碘酸希尔法阿尔新蓝染色试剂盒产品说明书（中文版）
主要用途
动物细胞糖蛋白高碘酸希尔法阿尔新蓝染色试剂是一种旨在通过阿尔新蓝和高碘酸希尔方法的结合，完整互补地分析细胞样品中蛋白多糖（糖蛋白）成分的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良传统方法、成功实验证明的。主要适用于各种动物培养细胞中的糖蛋白成分，尤其是酸性和中性粘多糖蛋白检测。产品即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。
技术背景
阿尔新蓝（alcian blue）染料是一种水溶性的铜酞菁基团（cuprophthalocyanine group）的碱性染料。由于分子中铜的存在，而呈现蓝色。在低pH的环境下，阿尔新蓝与多价阴离子硫酸化（sulfated）和羧化（carboxylated）自由基的多价阴离子反应，例如酸性粘多糖蛋白（acidic mucopolysaccharide）、唾液粘多糖蛋白（sialomucins）以及糖蛋白，和酸性基团形成盐键（salt linkage），呈现（通常高碘酸希尔法阴性）蓝色。高碘酸（periodic acid）可以氧化糖蛋白中的多糖（polysaccharide）糖基，包括乙二醇（1,2-glycol）中的碳原子，成为乙醛基团（aldehyde group），与希尔试剂（Schiff’s Reagent），即品红亚硫酸盐染料（fuchsin sulfite）发生反应，呈现品红色（magenda）或紫红色，表明中性粘多糖蛋白阳性。
产品内容
清理液（Reagent A） 100毫升
酸性液（Reagent B） 10毫升
染色液A（Reagent C） 10毫升
氧化液（Reagent D） 10毫升
染色液B（Reagent E） 10毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存在室温下；染色液A（Reagent C）和染色液B（Reagent E），严格密封瓶口，避免光照；试剂具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证6月
用户自备
通用型苏木素复染试剂盒（80067.1）：用于常规染色后复染
光学显微镜：用于细胞染色后观察分析
实验步骤
操作一：细胞载玻片染色
一、样本阿尔新蓝染色处理
- 取出待测的细胞载玻片或细胞涂片
- 小心加上200微升清理液（Reagent A）在载玻片或细胞涂片上，铺满整个样品表面
- 小心移去载玻片或细胞涂片上的清理液（Reagent A）
- 小心加上200微升酸性液（Reagent B），铺满整个载玻片或细胞涂片样品表面
- 室温下孵育3分钟
- 小心移去载玻片或细胞涂片上的酸性液（Reagent B）
- 小心加上200微升清理液（Reagent A）在载玻片或细胞涂片上，铺满整个样品表面
- 小心移去载玻片或细胞涂片上的清理液（Reagent A）
- 重复实验步骤7至8一次
- 小心加上200微升染色液A（Reagent C），铺满整个载玻片或细胞涂片样品表面
- 室温下孵育30分钟；或直至可见蓝色，避免光照
- 小心移去载玻片或细胞涂片上的染色液A（Reagent C）
- 小心加上200微升清理液（Reagent A）在载玻片或细胞涂片上，铺满整个样品表面
- 小心移去载玻片或细胞涂片上的清理液（Reagent A）
- 重复实验步骤13至14一次
二、样本高碘酸希尔染色处理
- 小心加上200微升氧化液（Reagent D），铺满整个样品表面
- 室温下，孵育10分钟
- 小心移去载玻片或细胞涂片上的氧化液（Reagent D）
- 小心加上200微升清理液（Reagent A）在载玻片或细胞涂片上，铺满整个样品表面
- 小心移去载玻片或细胞涂片上的清理液（Reagent A）
- 重复实验步骤4至5一次
- 小心加上200微升染色液B（Reagent E），铺满整个载玻片或细胞涂片样品表面
- 室温下孵育10分钟；或直至可见深红色，避免光照
- 小心移去载玻片或细胞涂片上的染色液B（Reagent E）
- 小心加上200微升清理液（Reagent A）在载玻片或细胞涂片上，铺满整个样品表面
- 小心移去载玻片或细胞涂片上的清理液（Reagent A）
- 重复实验步骤10至11一次
三、 （选择步骤）样本复染处理
- 样本复染处理（建议使用通用型苏木素复染试剂盒－80067.1）
- 放上盖玻片或封片
- 即刻在一般光学显微镜下观察：
酸性粘多糖蛋白――亮蓝色
中性粘多糖蛋白和其它糖蛋白――品红色
混合粘多糖蛋白――蓝色或紫色
细胞核――深蓝色（复染）
操作二：24孔细胞培养板染色
一、样本阿尔新蓝染色处理
- 小心抽去24孔细胞培养板里的培养液
- 小心加入400微升清理液（Reagent A），清洗生长中的细胞表面
- 小心抽去清理液（Reagent A）
- 小心加入400微升酸性液（Reagent B），覆盖整个生长表面
- 室温下孵育3分钟
- 小心抽去酸性液（Reagent B）
- 小心加入400微升清理液（Reagent A），清洗细胞表面
- 小心抽去清理液（Reagent A）
- 重复实验步骤7至8一次
- 小心加入400微升染色液A（Reagent C），铺满整个样品表面
- 室温下孵育30分钟；或直至可见蓝色，避免光照
- 小心抽去染色液A（Reagent C）
- 小心加入400微升清理液（Reagent A），铺满整个样品表面
- 小心抽去清理液（Reagent A）
- 重复实验步骤13至14一次
二、样本高碘酸希尔染色处理
- 小心加入400微升氧化液（Reagent D），铺满整个样品表面
- 室温下，孵育10分钟
- 小心抽去氧化液（Reagent D）
- 小心加入400微升清理液（Reagent A），铺满整个样品表面
- 小心抽去清理液（Reagent A）
- 重复实验步骤4至5一次
- 小心加入400微升染色液B（Reagent E），铺满整个样品表面
- 室温下孵育10分钟；或直至可见深红色，避免光照
- 小心抽去染色液B（Reagent E）
- 小心加入400微升清理液（Reagent A），铺满整个样品表面
- 小心抽去清理液（Reagent A）
- 重复实验步骤10至11一次
三、 （选择步骤）样本复染处理
- 样本复染处理（建议使用通用型苏木素复染试剂盒－80067.1）
- 即刻在一般光学显微镜下观察：
酸性粘多糖蛋白――亮蓝色
中性粘多糖蛋白和其它糖蛋白――品红色
混合粘多糖蛋白――蓝色或紫色
细胞核――深蓝色（复染）
注意事项
- 本产品为50次（细胞载玻片）和25次（1个24孔板）操作
- 操作时，须戴手套
- 所有操作在室温下进行
- 避免单纯使用甲醛和乙醛等处理样品；建议使用 Bouin固着液—12267
- 试剂可以重复使用
- 试剂具有腐蚀性，注意操作安全
- 试剂溶液避免细菌污染
- 染色液B（Reagent E）出现沉淀，可以温热、搅拌或过滤后使用
- 染色液B（Reagent E）须密封避光，如果变成红色，则影响染色效果
- 试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满样品表面
- 样品染色避免过度，肉眼可见深蓝或深红色即可终止染色
- 如果检测胞浆糖蛋白，需要进行样品预处理，例如：甲醛熏蒸（formaldehyde vapor）；或无水甲醇固定15分钟；或微波炉加热染色45秒
- 可以使用通用型苏木素复染试剂盒（80067.1），增强染色对比度
- 细胞染色完成后，即刻进行光学显微镜观察
- 本公司提供系列糖蛋白分析试剂产品
质量标准
- 本产品经鉴定性能稳定
- 本产品经鉴定显色清晰
