冰冻切片组织冯库萨（VON KOSSA）染色试剂盒使用说明

冰冻切片组织冯库萨（VON KOSSA）染色试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

冰冻切片组织冯库萨（VON KOSSA）染色试剂是一种旨在使用银还原技术，分析固定处理的组织细胞样本中钙沉积现象的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良VON KOSSA方法、成功实验证明的。主要适用于冰冻切片的组织钙沉积和钙化结节检测；同时也适合动物原生代或培养细胞的检测。广泛用于骨细胞或组织病理生理的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。

技术背景

钙盐变化是骨细胞增殖分化和骨组织成骨潜能的标志之一。通过嗜银染色，钙离子受到强光还原，由金属银沉积取代，呈现黑色。

产品内容

清理液（Reagent A）  120毫升

固着液（Reagent B）   10毫升

染色液（Reagent C）   10毫升

平衡液（Reagent D）   10毫升

产品说明书    1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent C），避免光照；有效保证6月

用户自备

核固红复染试剂盒（40011）：用于常规染色后复染

60瓦灯：用于还原钙离子

小型染色缸：用于组织细胞染色操作

光学显微镜：用于组织细胞染色后观察分析

实验步骤

• 样本固着处理

• 取出待测的5至10微米厚的冰冻切片或细胞载玻片 
• 小心加上200微升清理液（Reagent A）在切片或载玻片上，铺满整个样品表面
• 小心移去切片或载玻片上的清理液（Reagent A）
• 小心加上200微升固着液（Reagent B），铺满整个样品表面
• 室温下，孵育10分钟
• 小心移去切片或载玻片上的固着液（Reagent B）
• 小心加上200微升清理液（Reagent A），清洗样品表面
• 小心移去切片或载玻片上的清理液（Reagent A）
• 重复实验步骤7至8一次

二、样本染色处理

• 小心加上200微升染色液（Reagent C），铺满整个切片或载玻片样品表面
• 室温下置于太阳光直射或60瓦灯直射孵育60分钟；或直至可见黑色
• 小心移去切片或载玻片上的染色液（Reagent C）
• 室温下，小心将切片或载玻片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟
• 小心移去切片或载玻片上的清理液（Reagent A）

三、 样本复染处理

• 小心加上200微升平衡液（Reagent D）在切片或载玻片上，铺满整个样品表面
• 室温下孵育5分钟（注意：平衡液（Reagent D）具有褪色调节作用）
• 小心移去切片或载玻片上的平衡液（Reagent D）
• 室温下，小心将切片或载玻片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟
• 小心移去切片或载玻片上的清理液（Reagent A）
• 样本复染处理（核固红）
• 放上盖玻片或封片
• 即刻在一般光学显微镜下观察：钙沉积阳性细胞呈现黑色（如果复染：细胞质呈现粉红色，细胞核呈现红色）

注意事项

• 本产品为50次操作
• 操作时，须戴手套
• 所有操作在室温下进行
• 试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满样品表面
• 样品染色避免过度，肉眼可见黑色即可终止染色
• 建议使用核固红复染试剂盒（40011），增强染色对比度
• 样品染色完成后，即刻进行光学显微镜观察 
• 本公司提供系列组织细胞金属元素染色试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定显色清晰