细胞冯库萨（VON KOSSA）染色试剂盒使用说明
细胞冯库萨（VON KOSSA）染色试剂盒产品说明书（中文版）
主要用途
细胞冯库萨（VON KOSSA）染色试剂是一种旨在使用银还原技术，分析固定处理的细胞样本中钙沉积现象的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良VON KOSSA方法、成功实验证明的。主要适用于动物原生代或培养细胞的钙沉积和钙化结节检测。广泛用于骨细胞或组织病理生理的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。
技术背景
钙盐变化是骨细胞增殖分化和骨组织成骨潜能的标志之一。通过嗜银染色，钙离子受到强光还原，由金属银沉积取代，呈现黑色。
产品内容
清理液（Reagent A） 250毫升
固着液（Reagent B） 10毫升
染色液（Reagent C） 10毫升
平衡液（Reagent D） 10毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent C），避免光照；有效保证6月
用户自备
核固红复染试剂盒（40011）：用于常规染色后复染
60瓦灯：用于还原钙离子
小型染色缸：用于细胞染色操作
光学显微镜：用于细胞染色后观察分析
实验步骤
操作一：细胞载玻片染色
- 样本固着处理
- 取出待测的细胞载玻片
- 小心加上200微升清理液（Reagent A）在载玻片上，铺满整个样品表面
- 小心移去载玻片上的清理液（Reagent A）
- 小心加上200微升固着液（Reagent B），铺满整个样品表面
- 室温下，孵育10分钟
- 小心移去载玻片上的固着液（Reagent B）
- 小心加上200微升清理液（Reagent A），清洗样品表面
- 小心移去载玻片上的清理液（Reagent A）
- 重复实验步骤7至8一次
二、样本染色处理
- 小心加上200微升染色液（Reagent C），铺满整个载玻片样品表面
- 室温下置于太阳光直射或60瓦灯直射孵育60分钟；或直至可见黑色
- 小心移去载玻片上的染色液（Reagent C）
- 室温下，小心将载玻片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟
- 小心移去载玻片上的清理液（Reagent A）
三、 样本复染处理
- 小心加上200微升平衡液（Reagent D）在载玻片上，铺满整个载玻片样品表面
- 室温下孵育5分钟（注意：平衡液（Reagent D）具有褪色调节作用）
- 小心移去载玻片上的平衡液（Reagent D）
- 室温下，小心将载玻片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟
- 小心移去载玻片上的清理液（Reagent A）
- 样本复染处理（核固红）
- 放上盖玻片或封片
- 即刻在一般光学显微镜下观察：钙沉积阳性细胞呈现黑色（如果复染：细胞质呈现粉红色，细胞核呈现红色）
操作二：24孔细胞培养板染色
一、样本固着处理
1．小心抽去24孔细胞培养板里的培养液
2．每孔加入400微升清理液（Reagent A），清洗生长中的细胞表面
3．小心抽去每孔里的清理液（Reagent A）
4．每孔加入400微升固定液（Reagent B），覆盖整个生长表面
5．在室温下孵育10分钟
6．小心抽去固定液（Reagent B）
7．每孔加入400微升清理液（Reagent A），清洗细胞表面
8．小心抽去清理液（Reagent A）
9．重复实验步骤7和8两次
二、样本染色处理
- 小心加上400微升染色液（Reagent C），覆盖整个生长表面
- 室温下置于太阳光直射或60瓦灯直射孵育60分钟；或直至可见黑色
- 小心抽去染色液（Reagent C）
- 室温下，小心加入400微升清理液（Reagent A）
- 室温下孵育2分钟
- 小心抽去清理液（Reagent A）
三、 样本复染处理
- 小心加上400微升平衡液（Reagent D），覆盖整个生长表面
- 室温下孵育5分钟
- 小心抽去平衡液（Reagent D）
- 小心加入400微升清理液（Reagent A）
- 室温下孵育2分钟
- 小心抽去清理液（Reagent A）
- 样本复染处理（核固红）
- 即刻在一般光学显微镜下观察：钙沉积阳性细胞呈现黑色（如果复染：细胞质呈现粉红色，细胞核呈现红色）
注意事项
- 本产品为50次（细胞载玻片）和25次（1个24孔板）操作
- 操作时，须带手套
- 所有操作在室温下进行
- 试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满样品表面
- 样品染色避免过度，肉眼可见黑色即可终止染色
- 建议使用核固红复染试剂盒（40011），增强染色对比度
- 细胞染色完成后，即刻进行光学显微镜观察
- 本公司提供系列组织细胞金属元素染色试剂产品
质量标准
- 本产品经鉴定性能稳定
- 本产品经鉴定显色清晰
