真菌/酵母样品细胞细胞周期碘化丙啶红色荧光流式细胞分析试剂盒使用说明
真菌/酵母细胞样品细胞周期碘化丙啶（PROPIDIUM IODIDE）红色荧光
流式细胞分析试剂盒产品说明书（中文版）
主要用途
YIJI真菌/酵母细胞样品细胞周期碘化丙啶（PROPIDIUM IODIDE）红色荧光流式细胞分析试剂是一种旨在通过细胞流式仪测定真菌/酵母细胞中DNA结合碘化丙啶染料程度，来定量DNA含量，以进一步获取细胞周期分布状况的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种真菌/酵母细胞，包括芽殖酵母、裂殖酵母等的细胞周期分析。可以被用于细胞凋亡、信号传递、细胞分裂、代谢等的研究。产品严格无菌，即到即用，分辨率高，操作简捷，性能稳定。
技术背景
芽殖酵母（Saccharomyces cerevisiae）、裂殖酵母（Schizosacchromyces pombe）是研究真核生物细胞周期的模式生物。细胞周期是评价细胞代谢、生理和病理状况的重要指标。通过DNA结合染料，借助细胞流式仪，测定出DNA含量，根据DNA含量随着细胞周期的不同而发生变化，来确定和区别细胞周期的不同阶段。流式细胞术（FLOW CYTOMETRY）是七十年代发展起来的集计算机、激光、流体力学、细胞化学、细胞免疫学为一体的高科学技术。凋亡细胞是在正常G0/G1峰细胞群前出现亚二倍体峰（sub-G1）细胞群。
产品内容
YIJI清理液（Reagent A） 200毫升
YIJI固着液（Reagent B） 100毫升
YIJI抗干扰液（Reagent C） 25毫升
YIJI酶解液（Reagent D） 10毫升
YIJI染色液（Reagent E） 25毫升
产品说明书 1份
保存方法
保存YIJI抗干扰液（Reagent C）、YIJI酶解液（Reagent D）和YIJI染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；YIJI染色液（Reagent E）避免光照，有效保证6月
用户自备
2毫升离心管：用于细胞染色的容器
（微型）台式离心机：用于样品操作操作
培养箱或恒温水槽：用于反应孵育
细胞流式仪：用于细胞荧光分析
实验步骤
- 准备好5 X 106的待测真菌/酵母细胞
- 放进微型台式离心机离心1分钟，速度为16000g
- 小心抽去上清液
- 加入1毫升YIJI清理液（Reagent A）到2毫升离心管，混匀
- 放进微型台式离心机离心1分钟，速度为16000g
- 小心抽去上清液
- 缓慢加入2毫升预冷的YIJI固着液（Reagent B），且涡旋震荡混匀
- 放进4℃冰箱里孵育16小时
- 放进微型台式离心机离心1分钟，速度为16000g
- 小心抽去固着液
- 加入1毫升YIJI清理液（Reagent A），混匀
- 放进微型台式离心机离心1分钟，速度为16000g
- 小心抽去上清液
- 重复实验步骤11至13一次
- 加入500微升YIJI抗干扰液（Reagent C），混匀
- 放进37℃恒温水槽，孵育2至16小时
- 放进微型台式离心机离心1分钟，速度为16000g
- 小心抽去上清液
- 加入200微升YIJI酶解液（Reagent D），混匀
- 放进37℃恒温水槽，孵育20分钟
- 放进微型台式离心机离心1分钟，速度为16000g
- 小心抽去上清液
- 加入500微升YIJI清理液（Reagent A），混匀
- 放进微型台式离心机离心1分钟，速度为16000g
- 小心抽去上清液
- 加入500微升YIJI染色液（Reagent E），混匀细胞颗粒群
- 超声处理100瓦，30%功率，15秒
- 在暗室里37℃培养箱里孵育30分钟
- 移入到细胞流式仪专用测试管（可放进4℃冰箱里待测）
- 即刻进行细胞流式仪分析：波长488nm氩离子激光出现红色荧光（或488nm激发波长，610nm散发波长），观察50000个细胞以上
注意事项
- 本产品为50次操作
- 操作时，须戴手套
- 孵育时，必须避免光照
- 建议细胞染色完成后，即刻进行细胞流式仪分析。如果放进4℃冰箱里待测，不要超过1周
- 细胞流式仪分析前，须混匀内容物，或超声处理，避免细胞成团
- 细胞检测量不得少于10000个
- 告知流式仪技术员有关细胞类型
- 使用未经染色的细胞进行FSC与SSC设定，然后将染色细胞调整到未经染色细胞的水平，包括FL1、FL2、FL3的PMT
- 建议设定：
Detector FSC E00 Gain：3
Detector FL2-A Voltage：890 Gain：2
流速：500/秒
- 本公司提供系列细胞周期分析试剂产品
质量标准
- 本产品经鉴定性能稳定
- 本产品经鉴定荧光清晰
