酵母菌不同的破壁方法比较及革新的冷冻研磨法介绍

酵母菌高效破壁方法的革新

——终极研磨手段：冷冻研磨法

酵母菌是基因表达研究和重组蛋白生产的通用宿主。然而，传统酶解法进行酵母mRNA和内容蛋白提取通常非常困难。我们以细胞总RNA提取为例，对各种酵母破壁方法进行比较。我们用不同的方法对酵母菌破壁，然后用Trizol试剂进行RNA的提取，最后进行电泳检测，发现不同破壁方法效果如下：

SPEX公司Freezer/Mill冷冻研磨仪将上述液氮研磨法进一步改良，使酵母破壁这样的实验更加简单，无人值守即可完成。将样品装入密闭的研磨容器，浸入液氮，采用电磁振荡技术，电磁往复驱动钢制撞子，振荡装机样品，动能惯性更大，实现高动能撞子大面积撞击，快速粉碎研磨。过程中，样品始终处于液氮温度（-196°C）。

实验方法：

第一步：将样品研磨罐预冷冻。

第二步：将酵母菌液加入液氮中，控制速度，使菌液进入液氮中后形成小颗粒。将菌体液氮颗粒转入研磨罐中。放入冷冻研磨仪的样品仓。

第三步：设置研磨程序，预冷10-15min，研磨2min，15个循环，两次研磨之间间歇1min。

实验结果：

经检验，用此法能使得90%以上的酵母细胞破壁。酵母的RNA和细胞内蛋白保持高活性。