高通量组织研磨仪应用于果蝇RNA的提取

高通量组织研磨仪针对果蝇RNA提取的研磨方法

实验目的

对果蝇进行研磨，提取其RNA。

实验原理

通过研磨珠的撞击，充分研磨果蝇，进而提取其RNA。

实验材料和器具

样品：果蝇
仪器：高通量组织研磨仪（上海净信，Tissuelyser-24）
耗材：离心管，不锈钢研磨珠（上海净信，6号）

实验步骤

1.取5-10只果蝇放入研磨管中，盖紧研磨管. 加入研磨珠,13Hz,1min,充分匀浆（时间可根据样品本身的难易程度来调节，难磨的样品，可以延长时间，如一次运动两分钟还不是很充分，可以间隙的重复工作几次）
2.将研磨管放入高通量组织研磨仪中，60M/S研磨30S
3.机器停止后，取出研磨管，放入冷冻离心机中，于4度，10000g离心10分钟
4.小心吸取上清液500µL至新的1.5ML离心管中，盖上管盖，在室温上孵育15分种，使样品充分裂解至匀浆液较透明，如果仍有少量颗粒属于正常情况，不影响RNA提取质量和得率。
5.在1.5ML离心管中加入100µL氯仿，盖紧管盖，振荡混匀并将其在冰上孵育15分种，于4度，12000g离心15分钟。离心后混合物分层：上清层，中间层，下层；RNA存在于上清层中。
6.将上清层小心转移到一干净的离心管中，加入等体积冰浴的异丙醇，颠倒振荡混匀，将混合的样品在-20度条件，孵育20分种，于4度，12000g离心10分钟。RNA沉淀通常形成片状沉淀附着于管壁或管底。
7.小心弃去上清，用0.2体积的冰浴75%的乙醇洗涤RNA沉淀一次，颠倒洗涤离心管管壁，并旋涡振荡样品，尽可能让沉悬浮，于4度，12000g离心5分钟，再次去除上清，晾干沉淀。
8.操作的最后，在阴凉处适度干燥RNA沉淀（避免过分干燥，那样会降底它的可溶性）。
9.用适量（一般可用50—100µL）的无RNA酶水或TE溶液来溶解RNA。抽提好的RNA，保存于-70度。