Molecular Devices CatchPoint cAMP荧光检测试剂盒应用方案解析

介绍：

本研究展示了如何在 SpectraMax® i3多功能酶标仪中应用CatchPoint® cAMP荧光试剂盒监测腺苷酸环化酶激活剂forskolin对HEK293细胞的影响(如图1)。G蛋白偶联受体(GPCRs)是重要的跨膜蛋白，能将胞外信号传导入胞内，引起信号逐级放大的级联反应，导致胞内某些蛋白活性或表达的改变[1]。3’, 5’-磷酸化环腺苷(cAMP)作为第二信使参与GPCR活化后的下游反应。当胞外配体作用于GPCR时，GPCR构象发生改变，激活胞内连接的G蛋白。接下来的信号传导路径与被激活的G蛋白类型有关。其中当Gs蛋白被激活时，会导致腺苷酸环化酶活化引起的胞内cAMP浓度上调，进一步激活蛋白激酶A，最终促进一些目标蛋白的磷酸化，这些目标蛋白可能参与了例如多巴胺神经信号传导、葡萄糖再生反应、血管扩张、细胞有分裂、卵子成熟等重要生理生化过程[2-6]。CatchPoint® cAMP荧光检测试剂盒采用免疫竞争原理测得cAMP浓度(如图2)，仅需一步洗脱，且反应底物加入后短可放置10分钟，长可延至24小时后再检测，信号稳定灵敏。