光谱移液器与光纤分光光度计用于DNA/RNA定量检测
摘要
在紫外光及可见光光源下，用光谱移液器（WPI-SPT-2）在光纤分光光度计（TIDAS-1）中测量溶液中DNA的浓度（31µg/mL和144µg/mL）。由于只有1厘米光程，借助光谱移液器的使用不需要在此浓度范围内进行测量前的稀释，因此可以消除潜在的误差。由于光谱移液器设计小巧，可以在标准的200µL的PCR小管内对10µL的样本进行常规检测，甚至如果在PCR小管中对电极的尖端位置足够小心，像5µL 这样小的样本都可以重复测量。
实验过程
DNA的标准溶液（Sigma D1626）通过重力方法应用18.2MΩ/cm超纯水作为溶剂来制备，标准溶液的浓度在0.0µg/mL和143.9µg/mL 之间。应用光谱移液器对一式三份溶液进行测量，并将光谱移液器连接到装配紫外及可见光光源的光纤分光光度计上。数据在仪器全波段范围内（190nm-720nm）每增加1nm收集一次，仪器必须对产生总量80%吸光度的溶液进行测量，所有测量使用18.2 MΩ/cm超纯水作为参考溶液。
结果
实验结果如下表
Table 1: DNA 浓度和吸光度值
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DNA [µg/mL] |
260 nm吸光度 [AU] |
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0.00 |
-0.0061 ± 0.0001 |
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30.83 |
0.5745 ± 0.0011 |
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56.59 |
1.0309 ± 0.0020 |
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85.49 |
1.4497 ± 0.0016 |
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115.66 |
1.7170± 0.0025 |
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143.94 |
1.8280 ± 0.0006 |
因为吸光度与浓度关系遵循Beer-Lambert定律，也即：
A= εlc
预期的吸光度可以从DNA溶液中的浓度计算得来，DNA溶液透光系数ε列为0.020µg/ml*cm。
预期的吸光度可以从DNA溶液中的浓度计算得来，DNA溶液透光系数ε列为0.020µg/ml*cm。
图1中可以看到通过计算得到的吸光度测量值成一条直线，该线表示在260nm波长时的吸光度测量值。较高吸光度值时，与理论值产生的偏差是由于在光纤分光光度计中散射光干扰的结果。
Figure 1: 吸光度的测量值与理论值
Figure 2: 典型的DNA测量图 (56.6µg/mL)
标签：
光谱移液器；光纤分光光度计
