外泌体提取方法及其优缺点

外泌体研究持续升温，几乎所有研究者都面临这样一个问题：如何获得足够多的高纯度外泌体。外泌体的提取方法有很多，但提取的外泌体含量、纯度等各有优缺点，我们先来了解下几种常用的外泌体分离方法。

1、差速离心法

差速离心法是根据不同蛋白质分子及囊泡、细胞及细胞碎片等在均匀悬液中沉降速度的差异，通过逐渐增加离心力或离心时间，分离沉淀或上清的方法来提取。1）低速离心去除细胞和凋亡碎片，2）更高速离心以消除更大的囊泡，3）超高速离心沉淀外泌体，然后用0.22μｍ的滤膜去除凋亡小体、微泡等进一步纯化。
差速离心法操作简单，适合大体积样本中外泌体的分离、提取，不适用于微量及珍贵样本的研究。

2、密度梯度离心法

目前应用较多的是蔗糖密度梯度离心法，将细胞混合悬液或匀浆置于蔗糖介质的顶部，通过离心力的作用使细胞分层、分离，将外泌体从混杂物质中分离出来，然后使用滤膜进一步纯化。
蔗糖密度梯度离心法获取的外泌体纯度高，已作为药物载体用于临床试验。但前期准备工作繁琐，操作复杂耗时长。

3、qEV尺寸排阻法

qEV是采用尺寸排阻SEC原理按照分子粒径进行分段分离的方法。将生物样品流经具有固定孔隙的SEC填充物，吸附粒径较小的分子如蛋白、脂类等，而较大粒径的分子或颗粒不能进入孔隙。在缓冲液的作用下，较大粒径的囊泡（外泌体）流速快，在特定的阶段会被洗脱出来进入样品收集管，成为实验样品。而小分子具有较长的保留时间，最后被洗脱出来。

qEV技术有效避免了超速离心和密度梯度离心等传统方法分离囊泡（外泌体）时，由于超高离心力与蔗糖溶液高粘性造成的HDL蛋白或囊泡的聚集污染，也避免了传统方法对于囊泡（外泌体）的膜结构的损伤，使其保留完整的生物活性；不过，该方法耗时较长，不适合大量样本处理。

4、基于聚合物的沉淀技术

基于聚合物的沉淀技术通常包括将样本与含聚合物的沉淀溶液混合，在4℃温育并低速离心。用于聚合物沉淀的最常见聚合物之一是聚乙二醇（PEG）。用这种聚合物沉淀具有许多优点，包括对分离的外泌体影响小、pH中性等。目前大多数快速分离外泌体的商品化试剂盒都是基于此方法。 然而基于聚合物的沉淀方法可能会同时分离非囊泡污染物（包括脂蛋白）外泌体纯度不高。

华盈生物自主研发的Exosome Isolation Q3（简称EIQ3）系列外泌体提取剂盒，不仅有效提高外泌体得率，同时能够显著减少杂蛋白残留（如血清高丰度蛋白）。该试剂盒可以实现血清、血浆、尿液、细胞上清等液质样本中外泌体的快速提取，为后期外泌体研究的数据稳定性和可靠性提供保障。

华盈生物拥有高纯度的外泌体提取方案可以实现多种类型样品中外泌体的分离，包括血浆/血清、细胞上清、唾液、房水、胸腔积液、脑脊液、尿液、胆汁等多类型样本。针对不同类型的样本分别采用专属的外泌体提取方法，如超速离心、尺寸排阻、密度梯度离心等。还可以提供外泌体三项鉴定以及外泌体蛋白组学等服务助您解决外泌体研究中的各种难题。