如何选择合适的western Blot成像方法
最合适的Western blot实验方法取决于您期望获得哪些信息,以下内容将帮助您选择最佳实验方法。
化学发光方法
化学发光western blot是相对容易且灵敏度极高的检测方法,灵敏度可以达到fg级。
分子量差异显著的蛋白,通过电泳可轻松分离,使用“化学发光”检测非常方便。
优势: |
劣势: |
灵敏度高 容易,实验方案熟悉 兼容胶片和数字成像 |
半定量分析 酶促反应 仅能进行单一信号采集,上样量控制需要剥离和二次孵育 |
蛋白凝胶电泳:
检测单一蛋白
确定蛋白有无
检测抗体反应
蛋白纯度分析
检测低丰度蛋白
化学发光,单信号,单蛋白
荧光方法
荧光Western blot使用荧光染料标记的二抗进行检测,印迹膜上的靶标蛋白浓度与荧光信号强度呈线性关系,实现真实可靠的定量分析。荧光染料发射光谱不同,因此在一张 印迹膜上可实现多重检测。在无需剥离和二次孵育条件下,进行上样量质控,分析翻译后修饰蛋白时尤为适用。
荧光western blot使用 红外或者可见荧光染料.
优势: |
劣势: |
可进行多重检测 定量精准度高 荧光近红外印迹膜可储存,并可重复成像 |
灵敏度略低于化学发光方法 膜自发荧光导致背景噪音增加 |
可见荧光检测的优势
当需要同时检测三个蛋白时,可见荧光显然是最佳的选择。可见荧光具备很好的灵活性,有多种可见荧光染料可供选择。如果您正在使用可见荧光染料(发射光谱可被区分)进行 其它实验,很容易将这些染料应用于Western blot实验中。
荧光检测方法,可用于:
同时检测多种蛋白
研究翻译后修饰蛋白
同一印迹膜的上样量质控
多个泳道归一化
精确定量 Western实验
多重荧光,多种蛋白
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