【锐赛小课堂】miRNA研究之RNA标记

RNA标记是将标记物（如放射性同位素、荧光素或酶）共价地连接到RNA，通过检测标记物，进而实现对RNA鉴别和检测的目的。RNA标记在分子探针领域应用广泛，在疾病诊断方面也很有前景。

 

理想的RNA标记方法应符合以下要求：

1.  操作简单，灵敏度高

2.  不影响碱基配对的特异性

3.  不影响RNA活性

4.  对酶促反应活性无影响或影响不大

5.  检测方法具有高度灵敏性和高度特异性

6.  标记物对人体无害

 

按反应机制分如下四类：直接标记法，加尾标记法，基于逆转录反应的标记方法，基于RNA克隆扩增的标记方法。

 

常用于RNA标记的方法按标记物性质分为：

放射性同位素标记：32P、35S、3H

非放射性标记：半抗原荧光素化学发光物质

 

用生物素标记RNA的方法常见的是用生物素与UTP结合形成Biotin-UTP，以Biotin-UTPATP、CTP、GTP为底物通过RNA聚合酶SP6、T7等经体外转录合成标记RNA。

 

目前常见的荧光染料包括：异硫氰酸荧光素（FITC）四甲基异硫氰酸罗丹明四乙基罗丹明得克萨斯红藻红蛋白（PE）花青类染料(Cy3、Cy5)新型荧光素如量子点（半导体纳米晶体）。

 

点击化学（Clickchemistry）是2001年诺贝尔化学奖获得者美国化学家Sharpless提出的一种快速合成大量化合物的新方法。该技术在诸多领域尤其是生物偶联技术和生物医药方面有广泛应用前景。

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