PCR新手指南：PCR现在又扩增不出来了怎么办？

PCR新手指南：PCR现在又扩增不出来了怎么办？

这个问题是常见的问题，就是一个PCR实验一直都做得很好，停一段时间后再做就不行了。一通乱找原因后还是不行，很痛苦！

找问题要从大到小：

1、PCR扩增体系问题
用其他正在进行的且扩增正常的模板和引物证明PCR扩增体系没有问题，即PCR反应混合物、水、取液器、PCR仪、操作等都是好的（阳性对照）

2、引物问题
用以前扩增产物做模板（稀释50倍），证明引物没有问题

3、只是模板问题了。
因为样本降解的可能性比引物降解的可能性高得多。也可能是样本中的抑制物过多（新鲜时没有溶出来）。

不要靠运气找问题，先做第一条很重要。乱找问题常常让人失去信心的。