DNA合成仪合成原理介绍

DNA的固相合成:即DNA3'端固定于基质上，然后沿3'向5'方向依次添加核苷酸直至合成所需的DNA片段。不同于应用DNA聚合酶的DNA合成。

合成过程:

第一个碱基的3‘末端固定在树脂上，下一个碱基的5’-OH用二对甲氧三苯甲基DMT保护，碱基上的氨基用苯甲酸保护，然后对3‘-OH用氨基磷酸化合物进行活化。
1.1个碱基的5’-OH和下个碱基的3‘-OH形成亚磷酸三酯，

2.然后用碘氧化成磷酸三酯

3.加入二氯乙酸除去第二个碱基5’-OH上的保护剂DMT

循环进行加入下一个碱基合成完毕后

1.用苯硫酚除去5’-OH上的保护剂DMT

2.用浓氢氧化铵将片段与固体树脂断开，洗脱
3.用浓氢氧化铵在加热的条件下除去碱基上的保护剂

4.除去氢氧化铵，真空抽干

5.液相色谱或者PAGE，回收片段最长的。