罗氏454高通量测序平台的特点及应用

GS FLX系统减少了传统测序样品制备过程中对大型自动站的依赖，完全不需要进行繁琐的建库过程，也不必进行克隆挑取、微孔板处理等工作，利用创新的磁珠和emPCR技术进行样品制备，同时提供完整的后续生物信息学分析解决方案。

1) 样品种类：GS FLX系统支持各种不同来源的样品序列测定，包括基因组DNA，PCR产物，BACs，cDNA及小分子RNA等，不同类型的样品测序都可在一台仪器上完成。

2) 样品DNA打断：样品如基因组DNA或BAC等被打断成300-800bp的片段；对于小分子的非编码RNA，这一步骤并不需要。短的PCR产物则可利用GS融合引物扩增后直接进行步骤4)。

3) 加接头：借助一系列标准的分子生物学技术，将3′端和5′端有特异性的A和B接头连接到DNA片段上。接头也将在后继的纯化，扩增和测序步骤中用到。图中仅仅显示了后续步骤中要用到的单链的DNA片段。

4)  一条DNA片段＝一个磁珠：接头使成百上千条DNA片段分别结合到一个磁珠上，磁珠被单个油水混合小滴包被后，在这个小滴里进行独立的扩增，而没有其他的竞争性或者污染性序列的影响；所有DNA片段进行平行扩增(emPCR)。

5) 一个磁珠＝一条读长：经过emPCR扩增后，每个磁珠上的DNA片段拥有了成千上万个相同的拷贝。经过富集以后，这些片段仍然和磁珠结合在一起，随后就可以放入到Pico Titer Plate板中供后继测序使用了。

6) 数据读取和分析工具：GS FLX 系统提供三种不同的生物信息学工具对测序数据进行分析，适用于不同的应用。例如多达3GB序列的重测序，对比已知参考序列进行的扩增产物差异分析及 120MB的从头测序工作等。