荧光二抗甄选择的方法介绍
在生物医学研究中，荧光标记技术因其高灵敏度和特异性而被广泛应用于各种实验中，如细胞成像、蛋白质定位、流式细胞术等。荧光二抗（荧光标记的二抗）是其中一种关键的试剂，其选择方法对实验结果的准确性和可靠性至关重要。
1、如何选择荧光基团?
在选择用于科学研究的荧光基团时，主要考虑荧光基团组合的设计。在用于多重检测实验时，选择彼此兼容的荧光基团组合以及检测和分析它们的仪器是至关重要的。
（1）建议使用明亮的荧光基团(如PE, Alexa Fluor®488)检测弱表达的靶标，而不太明亮的荧光基团(如FITC)可用于检测大量表达的靶标；
（2）考虑每个荧光基团的激发和发射光谱，最大限度地减少光谱重叠和避免背景干扰也很重要；根据仪器具有的激光激发波长和检测通道选择合适的荧光基团；
（3）另外选择光谱不与内源荧光重叠的荧光基团，检查未染色的标本以确定样品是否显示自身荧光。
（4）另一个策略是确认多个荧光二抗组合时产生的荧光信号与单个荧光抗体相同；这将排除由于不同抗体混合在一起而产生的交叉反应或阻断效应。可以用单个荧光抗体作为对照。
（5）另外，所有的荧光基团都应该妥善储存，远离光线。到保质期的试剂应该与新试剂一起测试，以确保亮度不受影响。一些荧光基团可能对常见的固定和渗透缓冲液敏感，在实验时应进行优化。某些荧光基团可能与某些细胞类型或结构非特异性结合，虽然封闭液可以防止这种情况，在和其他荧光基团一起使用时需要检查。
2、抗体特异性
理想的荧光二抗应具有高度特异性，能够特异性识别目标抗原，避免非特异性结合。这不仅有助于提高实验结果的准确性，还能减少背景噪声。在选择荧光二抗时，应仔细查阅产品说明书，了解其特异性和交叉反应情况。Jackson提供超2000种的预吸附二抗，可以最大程度地消除了特点物种之间交叉反应，适合用于多标记的IF/IHC/ICC实验，并可获得更低的背景值。
3、抗体浓度
荧光二抗的浓度直接影响荧光信号的强度和背景噪声。过高的抗体浓度可能增加非特异性结合，导致背景噪声增加；而过低的抗体浓度则可能使信号强度不足。实验中应通过预实验确定最佳抗体浓度，以获得最佳的荧光信号。
4、抗体形式
在研究某些细胞和组织时（如白细胞群体：巨噬细胞、B细胞、自然杀伤细胞等；某些组织：淋巴结，脾脏，外周血等），这些细胞或组织因表面Fc端受体过多，会与抗体分子中的Fc端相结合，从而导致非特异性结合和高背景的现象（如下图所示），俗称“假阳性”。
使用F(ab')₂ 形式的二抗可以避免其与活细胞中的Fc受体非特异性结合，从而提高实验准确性。
5、反应种属
荧光二抗的反应种属应和一抗的宿主来源一致，如果是多标荧光实验，多个二抗的宿主来源最好一致，并且建议选择预吸附二抗以减少交叉反应。
Jackson ImmunoResearch Inc.（JIR）是世界著名二抗生产商，致力于生产亲和纯化的二抗金标准品牌。
Jackson荧光二抗的优势：
1. 高灵敏度，线性范围广；
2. 高稀释比，性价比高；
3. 高特异性：10种特异性，包括IgG(H+L)、IgG Light Chain、IgG F(ab’)2、IgG VHH、IgG Fc、IgG + IgM、IgA + IgG + IgM、IgM、IgA和IgE；
4. 种属丰富：16种种属，包括小鼠、大鼠、人、兔、绵羊、羊驼、牛、猫、鸡、狗、山羊、绵羊、豚鼠、马、仓鼠、猪；
5. 标记丰富：从蓝光到近红外光谱范围（400 nm~1400 nm）内，涵盖了19种不同的荧光标记染料，分辨率高并且仪器兼容性广；
6. 稳定性好：亲和纯化二抗，光耐受性（抗淬灭性）强，水溶性好，储存不会产生沉淀，pH值不敏感；
7. 可消除物种之间的交叉反应：Jackson提供超2000种的预吸附二抗，可以最大程度地消除了特点物种之间交叉反应，适合用于多标记的IF/IHC/ICC实验，并可获得更低的背景值。（产品名称min X后的物种已验证过不会交叉反应）。
1、如何选择荧光基团?
在选择用于科学研究的荧光基团时，主要考虑荧光基团组合的设计。在用于多重检测实验时，选择彼此兼容的荧光基团组合以及检测和分析它们的仪器是至关重要的。
（1）建议使用明亮的荧光基团(如PE, Alexa Fluor®488)检测弱表达的靶标，而不太明亮的荧光基团(如FITC)可用于检测大量表达的靶标；
（2）考虑每个荧光基团的激发和发射光谱，最大限度地减少光谱重叠和避免背景干扰也很重要；根据仪器具有的激光激发波长和检测通道选择合适的荧光基团；
（3）另外选择光谱不与内源荧光重叠的荧光基团，检查未染色的标本以确定样品是否显示自身荧光。
（4）另一个策略是确认多个荧光二抗组合时产生的荧光信号与单个荧光抗体相同；这将排除由于不同抗体混合在一起而产生的交叉反应或阻断效应。可以用单个荧光抗体作为对照。
（5）另外，所有的荧光基团都应该妥善储存，远离光线。到保质期的试剂应该与新试剂一起测试，以确保亮度不受影响。一些荧光基团可能对常见的固定和渗透缓冲液敏感，在实验时应进行优化。某些荧光基团可能与某些细胞类型或结构非特异性结合，虽然封闭液可以防止这种情况，在和其他荧光基团一起使用时需要检查。
2、抗体特异性
理想的荧光二抗应具有高度特异性，能够特异性识别目标抗原，避免非特异性结合。这不仅有助于提高实验结果的准确性，还能减少背景噪声。在选择荧光二抗时，应仔细查阅产品说明书，了解其特异性和交叉反应情况。Jackson提供超2000种的预吸附二抗，可以最大程度地消除了特点物种之间交叉反应，适合用于多标记的IF/IHC/ICC实验，并可获得更低的背景值。
3、抗体浓度
荧光二抗的浓度直接影响荧光信号的强度和背景噪声。过高的抗体浓度可能增加非特异性结合，导致背景噪声增加；而过低的抗体浓度则可能使信号强度不足。实验中应通过预实验确定最佳抗体浓度，以获得最佳的荧光信号。
4、抗体形式
在研究某些细胞和组织时（如白细胞群体：巨噬细胞、B细胞、自然杀伤细胞等；某些组织：淋巴结，脾脏，外周血等），这些细胞或组织因表面Fc端受体过多，会与抗体分子中的Fc端相结合，从而导致非特异性结合和高背景的现象（如下图所示），俗称“假阳性”。
使用F(ab')₂ 形式的二抗可以避免其与活细胞中的Fc受体非特异性结合，从而提高实验准确性。
5、反应种属
荧光二抗的反应种属应和一抗的宿主来源一致，如果是多标荧光实验，多个二抗的宿主来源最好一致，并且建议选择预吸附二抗以减少交叉反应。
Jackson ImmunoResearch Inc.（JIR）是世界著名二抗生产商，致力于生产亲和纯化的二抗金标准品牌。
Jackson荧光二抗的优势：
1. 高灵敏度，线性范围广；
2. 高稀释比，性价比高；
3. 高特异性：10种特异性，包括IgG(H+L)、IgG Light Chain、IgG F(ab’)2、IgG VHH、IgG Fc、IgG + IgM、IgA + IgG + IgM、IgM、IgA和IgE；
4. 种属丰富：16种种属，包括小鼠、大鼠、人、兔、绵羊、羊驼、牛、猫、鸡、狗、山羊、绵羊、豚鼠、马、仓鼠、猪；
5. 标记丰富：从蓝光到近红外光谱范围（400 nm~1400 nm）内，涵盖了19种不同的荧光标记染料，分辨率高并且仪器兼容性广；
6. 稳定性好：亲和纯化二抗，光耐受性（抗淬灭性）强，水溶性好，储存不会产生沉淀，pH值不敏感；
7. 可消除物种之间的交叉反应：Jackson提供超2000种的预吸附二抗，可以最大程度地消除了特点物种之间交叉反应，适合用于多标记的IF/IHC/ICC实验，并可获得更低的背景值。（产品名称min X后的物种已验证过不会交叉反应）。
