小鼠糖化血红蛋白A1c（GHbA1c）试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T
30nmol/L - 1162nmol/L
 
使用目的：
本试剂盒用于测定小鼠全血样本中糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)含量。

实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)水平。用纯化的小鼠糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)，再与HRP标记的糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)浓度。

试剂盒组成

1	30倍浓缩洗涤液	20ml×1瓶	7	终止液	6ml×1瓶
2	酶标试剂	6ml×1瓶	8	标准品（2000nmol/L）	0.5ml×1瓶
3	酶标包被板	12孔×8条	9	标准品稀释液	1.5ml×1瓶
4	样品稀释液	6ml×1瓶	10	说明书	1份
5	显色剂A液	6ml×1瓶	11	封板膜	2张
6	显色剂B液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1个

标本要求 
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

1000nmol/L	5号标准品	150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
500nmol/L	4号标准品	150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
250nmol/L	3号标准品	150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
125nmol/L	2号标准品	150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
62.5nmol/L	1号标准品	150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。