平行反应监测（PRM）的原理及应用

平行反应监测（Parallel Reaction Monitoring，PRM）是质谱分析中的一种方法，广泛用于生物分子，特别是蛋白质的定量分析。然而，关于PRM是否属于绝对定量的问题，往往会引发疑惑。那么，PRM真的是绝对定量的吗？在这篇文章中，我们将详细探讨这个问题。

1. 平行反应监测（PRM）简介

PRM是一种质谱技术，其在靶向蛋白质分析中尤其有用。它利用了高分辨质谱仪的精确度，通过选择特定的前体离子（代表目标蛋白质的特异性肽段），并在碰撞细胞中对其进行分解，然后监测所有产生的碎片离子。这样，通过测量这些碎片离子的强度，可以推断出目标蛋白质的量。

图1

2. 绝对定量和相对定量

绝对定量方法需要对样品中目标分子的确切浓度进行度量，这需要使用一个准确的浓度标准或内标。相对定量则是基于比较，在同一样品中或者在不同样品中比较目标分子的丰度。

3. PRM在绝对定量中的应用

PRM本身并不直接提供绝对定量，但当结合适当的内标技术时，可以实现绝对定量。其中一种常用的内标是稳定同位素标记的肽段（如13C、15N标记的肽段）。这种标记的肽段在质谱中的表现与自然丰度的肽段几乎相同，但由于质量的微小差异，可以在质谱图上将它们区分开来。

首先，我们需要知道内标肽段的准确浓度，然后将其添加到样品中。在质谱分析中，由于内标肽段和样品中的自然丰度肽段同时被测量，因此可以通过比较它们的峰高或面积来推算出目标蛋白质的绝对浓度。这种方法可以消除实验过程中的各种变量，如样品制备、离子化效率等。

因此，尽管PRM本身不是绝对定量技术，但结合适当的内标技术，PRM可以用于绝对定量。这使得PRM成为了蛋白质组学研究中非常强大的工具，因为它可以精确、可靠地测量目标蛋白质的丰度，从而提供了关于生物系统状态的重要信息。