ELISA试验手工洗涤具体操作步骤

ELISA 即酶联免疫吸附测定，是一类常用的免疫酶技术。主要方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，然后利用酶标记（偶联）的抗体或抗原与之孵育，加入显色剂显色，通过酶标仪测定待测物颜色与标准物颜色的差异，绘制出酶活曲线得出待测物浓度。ELISA操作步骤复杂，影响反应因素较多，洗涤在ELISA试验过程中虽不是一个反应步骤，但却也决定着实验的成败。

ELSIA试验就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在ELISA试验操作中，洗涤是最主要的关键技术。洗涤的方式除某些ELISA试验仪器配有特殊的自动洗涤仪外，手工操作有浸泡式和流水冲洗式两种，过程如下：

1.浸泡式
①吸干或甩干孔内反应液；
②用洗涤液过洗一遍；
③浸泡，即将洗涤液注满板孔，放置1～2分钟，间歇摇动，浸泡时间不可随意缩短；
④吸干孔内液体，吸干应*，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液体后在清洁毛巾上拍干；
⑤重复操作③和④，洗涤3～4次。在间接法中如本底较高，可增加洗涤次数或延长浸泡时间。

2.流水冲洗式
流水冲洗法最初用于小珠载体的洗涤，洗涤液仅为蒸馏水甚至可用自来水。洗涤时附接一特殊装置，使小珠在流水冲击下不断地滚动淋洗，持续冲洗2分钟后，吸干液体，再用蒸馏水浸泡2分钟，吸干即可。浸泡式犹如盆浴，流水冲洗式则好比淋浴，其洗涤效果更为*，且也简便、快速。已有实验表明，流水冲洗式同样也适用于微量滴定板的洗涤。洗涤时设法加大水流量或加大水压，让水流冲击板孔表面，洗涤效果更佳。