THP-1细胞培养经验与要点
该细胞从一名1岁的患有急性单核细胞性白血病的男孩的外周血中分离建立。该细胞可以吞噬乳胶颗粒和激活的红细胞，细胞膜和胞浆内均没有免疫球蛋白，表达C3R和FcR；可受佛波酯TPA诱导向单核系方向分化；可作为转染宿主。
细胞名称：人单核细胞白血病细胞细胞简称：THP-1
细胞别名：THP1; THP 1; THPI; THP-1(ATCC); O-THP-1; Tohoku Hospital Pediatrics-1
产品货号：TCH-C361
细胞形态：单核细胞样
生长特性：悬浮生长
培养体系：RPMI-1640+10%FBS+0.05 mM β-mercaptoethanol+1%P/S
THP-1细胞培养注意要点
➊ THP-1细胞为悬浮生长，部分细胞聚集成团，部分细胞分散。
➋ THP-1细胞更喜欢酸性环境，在偏酸性环境中，THP-1生长更快，所以当培养基稍微变黄（呈橘红色）时，是适合细胞生长的，此时补液或半换液即可。
➌ THP-1细胞有密度依赖性，THP-1细胞密度低时，生长较慢，培养密度维持在4 ~8×105 /mL为宜；超过2.0 ×106 /mL则需要传代。
➍ THP-1细胞对机械力较敏感。正常培养时，应尽量避免吹打力道过大。暴力吹打会使细胞分化和死细胞增加。
➎ 血清质量差异可能引起细胞状态变化，建议选用高质量的胎牛血清。
THP-1细胞换液
➊ 补液法：培养基变黄时可补加适量（1~2mL）新鲜培养基，补加1-2次之后，用离心的方式全部换液，离心1200rpm （约250g）3分钟。
➋ 半换液法：以T25瓶子为例，瓶子里装有5mL培养基。竖起瓶子静置一段时间，待细胞沉底，小心吸出2.5mL的培养基，转移到离心管，离心1200rpm （约250g）3分钟，检查有没有沉淀，以免损失细胞；原瓶补充2.5mL新鲜培养基，离心管里若有细胞，则用新鲜培养基重悬后放回原瓶。➌ 如果换液后第二天培养基就变得很黄，同时镜下检查未污染，说明细胞密度大，应该传代。
THP-1细胞传代
➊ 摇晃培养瓶，把细胞摇匀，均分到两个瓶子里，每瓶再补充等量培养基。
➋ 离心法：离心后计数，按照40-50万细胞/mL的密度接种到T25瓶里，瓶中培养基量以5mL为宜。不方便计数时，按1:2比例传代。➌ 死细胞或细胞碎片较多的情况下，建议用离心法传代，离心转速可适当降低（推荐800~1000rpm或160~200g）。
THP-1细胞冻存
➊ 由于THP-1是悬浮细胞，更易受到冻存影响，建议加大冻存密度，大约200万-300万/mL为宜，以提高复苏存活率。➋ THP-1细胞对冻存温度比较敏感，建议冻存后立即转入-80℃冰箱，长期保存应放在液氮罐中。
➌ 经测试，THP-1使用非程序降温冻存液的复苏存活率高于程序降温冻存液，推荐使用HyCyte™一步冻存液（GUCP-R201）。
THP-1细胞复苏
THP-1细胞复苏后通常需要3-5天恢复状态，建议复苏后48小时内不要进行操作。
THP-1培养常见问题及解决方法
➊ 培养基里一定要加β-巯基乙醇（ β-mercaptoethanol）吗？
β-巯基乙醇是一种常用的培养补充剂，有抗氧化的作用，可减少氧化应激对THP-1细胞的影响。当细胞密度过大但需要维持时，可适当增加巯基乙醇的比例（不超过标准量的1.5倍）。
➋ 悬浮细胞在镜下观察时，难以聚焦或估算密度怎么办？
悬浮细胞会随着液体流动，不容易聚焦，静置5-10分钟使细胞沉底，之后再轻轻放上显微镜观察，将有助于聚焦和估算细胞密度。
➌ THP-1细胞在培养过程中细胞发生聚团怎么办？
少量细胞聚团，呈葡萄串状，属于正常现象，特别是细胞密度较低时，易出现这种情况。更换血清品牌或增大血清比例（不超过20%）有助于解决聚团问题。不建议将聚团的细胞吹散，等待密度高时，会自己分散开。
➍ THP-1细胞在培养过程中细胞发生贴壁怎么办？
少量细胞贴壁属于正常情况，将细胞悬液转移至新瓶中即可。当贴壁细胞的比例高于20%，说明细胞生长环境有异常，需排查培养箱设置、培养基成分，以及培养器皿是否异常。
