图1. BLBS原理
进一步,作者将BSLB上的tSV洗脱下来,并利用NanoFCM对tSV和细胞上清获得的EVs进行综合表征和对比。发现tSV颗粒大小在82.13± 0.75nm,而EVs的粒径为65± 25nm,明显小于tSV的粒径大小。用NanoFCM的Exo粒径标准品(含68, 91, 113, 155 nm四种尺寸的SiO2球),对EVs和tSV的粒径进行分群,发现与EVs相比,tSV中大于113nm和155nm的颗粒所占比例更高(图2-d);tSV中TCR、CD40L、CD81阳性的tSV颗粒粒径显著大于对应的EVs阳性的颗粒(图2-e)。
图2. tSV和EVs颗粒大小亚群分类
进一步地,对tSV和EVs进行CD81和TCRαβ双标,发现tSV中两种标志物双阳的比例高于EVs,且TCR阳性的tSV粒径也显著大于TCR阳性的EVs(图3)。后续作者研究发现不同种类的T细胞来源的tSV内容物具有明显区别;tSV比EV携带更多的RNA结合蛋白和特有的microRNA等,感兴趣的读者可以阅读原文进行了解。总的来说作者提出了珠状脂质双分子层(BSLB)作为一种多功能的合成APCs来捕获、表征和促进对tSV生物发生的理解,开发了一种免疫细胞间信息传递和交流研究的新方法。
图3. tSV和EVs功能亚群分析
文章中利用NanoFCM对tSV和EVs的亚群进行精细分类,根据颗粒的大小将tSV和EVs分成四个不同大小的亚群,通过抗体标记,可对tSV和EVs 功能亚群进一步精细研究。利用NanoFCM单颗粒水平和超高分辨率的优势,可对tSV的不同亚群进行精细分类和研究,有望加快研究者对tSV的精细化研究进程!
参考文献
Céspedes P F, Jainarayanan A, Fernández-Messina L, et al. T-cell trans-synaptic vesicles are distinct and carry greater effector content than constitutive extracellular vesicles[J]. Nature communications, 2022, 13(1): 3460.