酶标板性能判断的三个方法

酶标板(ELISA PLATE):在酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)中, 参与免疫学反应的抗原、抗体、标记抗体或抗原的纯度、浓度和比例；缓冲液种类、浓度和离子强度、pH值和反应温度、时间等条件起着关键作用。此外,作为载体的固相聚苯乙烯(Polystyrene)表面对抗原、抗体或抗原抗体复合物的吸附也起着重要作用。 抗原、抗体和其它生物分子通过多种机制吸附至载体表面，这包括通过疏水键、流水/离子键的被动吸附,通过引入其它活性基团如氨基和碳基的共价结合，以及通过表面改性后的亲水键结合。
                        
酶标板性能判断：
良好的酶标板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间、同一板各孔之间性能相近。酶标板由于原料的不同和制作工艺的差别，各种产品的质量差异很大，因此，每一批号的酶标板在使用前须事先检查其性能。
1、常用的检查方法为：以一定浓度的人igg（一般为10ng/ml）包被elisa板各孔，洗涤后每孔内加入适当稀释度的酶标抗人igg抗体，保温后洗涤，加底物显色，终止酶反应后，分别测每孔溶液的吸光度。控制反应条件，使各孔读数在吸光度0.8左右。计算全部读数的平均值。所有单个读数与全部读数的均数之差，应小于10%。以下以a、b、c三款酶标板为例。
2、直接法：检测human igg在酶标板表面的吸附
3、双抗体夹心法：包被山羊抗人抗体检测阳性血清中抗原
由上图可以看出，这三类酶标板中，a类酶标板具有更好的蛋白吸附效果，同时也提高蛋白吸附的灵敏度，能够提供更为可靠的实验数据。另外，可以询问酶标板的批内差异，以下是某款酶标板的批内差异。由批内差异数据图可以看出，该酶标板具有很好地批间稳定性，批内变异系数（cv）差异均在5.0％附近，明显低于业内关于临床免疫反应用酶标板的质量控制标准中批内变异系数低于10.0%的要求，因此也适合用于elisa实验。