ATCC细胞实验步骤与使用方法

ATCC细胞实验步骤：

1、RNA的提取;

2、反转录合成cDNA;

3、PCR扩增;

4、产物的电泳和结果的测定。

ATCC细胞使用方法：

1、细胞传代：

细胞生长至覆盖培养瓶的85%及以上面积时，收集瓶内液体于15ml离心管中，1000rpm离5min，弃上清，用12ml完全培养基重悬细胞，按1:2的比例进行接种传代，接种到25cm2培养瓶中，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养，2-3天更换培养液。换液的步骤同细胞 NK-92细胞，ATCC细胞，培养技术传代步骤。

2、细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的85%及以上面积时，收集瓶内液体于15ml离心管中，1000rpm离心5min，弃上清，用适当量的冻存液（基础培养基：FBS：DMSO=5:4:1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

2）先将细胞冻存管放置于4℃ 0.5h，再放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃隔夜，24h后可转入液氮中进行长期保存。

3、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具）， 快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2）将冻存管中的细胞移至含有5ml完全培养液的15ml离心管中，然后1000rpm/min，离心5min；

3）弃上清，沉淀细胞用6ml完全培养基重悬，接种到培养瓶中，后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。