Countstar Rigel 荧光细胞分析仪在干细胞研究领域中的应用

一、干细胞的分类
干细胞（stem cell）是一类具有多向分化潜能和自我复制能力的原始的未分化细胞，是形成哺乳类动物的各组织器官的原始细胞。根据其分化潜能，可以分为：
①全能干细胞：可分化成人体的各种细胞，从而组成各种组织和器官，最终发育成为一个完整的生物体（受精卵）；
②亚全能干细胞：是人体发育过程中存留于多种组织中的，其分化能力接近于全能的成体干细胞；
③多能干细胞：具有分化多种组织的潜能，但失去了发育完整个体的能力（间充质干细胞）；
④专能干细胞：由多能干细胞分化而来，只能向一种类型的细胞分化（肝脏干细胞等）。

图1.干细胞图片（摘自网络）

二、干细胞的特性
    ①自我更新：
    干细胞可以通过自我复制，产生与亲本完全相同的子代细胞，以保持干细胞数量的恒定，可通过分裂维持自身细胞的特性和大小；
    ②多向分化：
    干细胞在一定条件下可以进入分化程序，可进一步多向（或定向）分化为逐步成熟的次级子代细胞，最终形成功能特异的组织细胞，在组织修复和新陈代谢中起重要作用；
    ③自动归巢：
    干细胞在体内定向迁移至特定的组织部位，在不同环境的诱导下，依赖性地分化为特定的组织细胞；
    ④免疫原性低：
    脐带、胎盘来源的干细胞表面抗原不明显，免疫原性低，不存在免疫排斥的特性。

三、干细胞治疗的原理
   ①替代修复死亡和受损的细胞；
   ②激活休眠和处于抑制状态的细胞；
   ③旁分泌作用（分泌神经营养因子、抗凋亡因子等）；
   ④促进细胞间电能力、电传导的恢复，如间充质干细胞分泌连接蛋白帮组细胞间连结、促进离子通道的开放等。

四、干细胞移植的优点

• 高效性，疗效肯定；
• 靶向性强，具有DC导航系统；
• 具有安全性，无排斥反应，安全性高，副作用小；
• 取材方便，治疗方法简便，痛苦性小；
• 细胞治疗的供体可以是自体，也可以是异体；
• 细胞治疗为疑难杂症的治疗带来新的希望。

五、干细胞制剂的制备工艺流程
 

六、干细胞企业质量控制策略（MSC）

七、Countstar Rigel S2在干细胞研究过程中的应用

• 干细胞浓度和活率的检测

无论是对脐带血样本进行检测以筛选单核细胞，还是对纯化培养的干细胞，又或者是检测冻存复苏的干细胞制品，Rigel 都可以排除杂质干扰，进行稳定准确的判断。

图2. A.明场图片；B.Rigel 荧光图片

• 干细胞运输前后的活率检测

Countstar Rigel可以对干细胞运输前后进行活率的精准计数，传统方法台盼蓝计数对运输后状态不佳的细胞活率无法精确检测，Rigel可以很好地解决这个问题。

图3. 脂肪干细胞运输前后活率检测

• 干细胞纯度及均一性检测

干细胞治疗中，要保证干细胞的纯度，排除免疫细胞等的干扰，可以通过Rigel对干细胞表面的Marker进行检测。同时为了保证干细胞的均一性，可以用Rigel对干细胞的形态学进行检测。干细胞随着传代次数和运输，会发生形态学的变化，如直径结团率等。Rigel可以通过检测干细胞表面相关Marker，坚定干细胞的纯度。

图4. A.干细胞形态学的变化  B.Marker CD105检测及分析（Rigel 拍摄）

• 干细胞入库检和放行检的表型分析

根据国际细胞治疗协会（ISCT）提出的间充质干细胞（MSC）标志物，MSC的常用阳性指标是CD73、CD90、CD105，阴性指标是CD45、CD34、CD14、CD11b、CD19等。Countstar Rigel 可以对CD90、CD105、CD45、CD34等多个指标进行检测并用类流式软件FSC软件进行分析。

图5. A. FSC软件分析结果  B.Rigel 所摄图片

• Countstar Rigel满足干细胞研发-临床-生产的多重需要和保持数据一致性

• Countstar Rigel在使用过程中也智能、精准、合规。