酶联免疫分析（ELISA）试剂盒原理各种方法与步骤

酶联免疫分析（ELISA）试剂盒原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中酶联免疫分析（ELISA）试剂盒水平。用纯化的捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入酶联免疫分析（ELISA）试剂盒，再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠超敏C反应蛋（hs-CRP）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中酶联免疫分析（ELISA）试剂盒含量。

酶联免疫分析（ELISA）试剂盒性能：

1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。

2.批内变异系数与批间变异系数应分别小于10%和15% 。

操作步骤：

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.  样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，标准品孔和样本孔中酶联免疫分析（ELISA）试剂盒每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。