稳定同位素标记 SILAC 技术实验流程简介

一、SILAC概述
         SILAC即细胞培养条件下稳定同位素标记技术(Stable isotope labeling with amino acids in cell culture，SILAC)，其基本原理是在细胞培养时，采用含有轻、中、重同位素型必需氨基酸的培养基进行细胞培养，用于SILAC主要的稳定同位素氨基酸是Lys和Arg, 细胞在传代培养过程中同位素氨基酸将被细胞用于合成蛋白质，细胞经传代培养5-6代后，细胞的所有蛋白质将被同位素标记，等量混合标记的蛋白质后经过SDS-PAGE分离和质谱分析，通过比较一级质谱图中三个同位素型肽段的面积大小进行相对定量，同时二级谱图对肽段进行序列测定从而鉴定蛋白质。

         由于SILAC标记技术是体内标记技术，几乎不影响细胞的功能，同时灵敏度高，因此其在蛋白质组学相关领域中得到了广泛的应用，如比较蛋白质组学，蛋白质与蛋白质相互作用，蛋白质与DNA相互作用，蛋白质与RNA相互作用等领域。
 
二、与体外标记技术相比，辉骏生物SILAC属于体内标记，具有以下技术优势
     1、高通量，可同时鉴定并定量数百至数千种蛋白质；
     2、定量精确，降低由于样品制备不同而造成的实验差异；
     3、线性定量范围广；
     4、灵敏度更高，蛋白质需要量明显减少；
     5、标记采用的是体内标记技术，更接近样品真实状态。
 
三、辉骏生物SIALC技术服务流程
 
 
四、辉骏生物SILAC技术服务内容
    1、细胞同位素标记；
    2、样本制备与定量；
    3、SDS-PAGE分离；
    4、胰酶酶切后液相分离和质谱分析；
    5、数据库检索；蛋白质定量分析；
    6、相关生物信息学分析；
    7、实验报告提交。
 
五、送样须知
    1、技术咨询：在您开始实验之前，本公司将为您竭诚提供最有效的SILAC实验设计方案，本公司提供Lys和Arg均为L、M 、H标记的氨基酸。
    2、为了保证SILAC实验能顺利进行，样品寄送需满足以下要求：
   基本要求：SILAC实验仅适用于能在SILAC培养基中培养的材料，具体情形请咨询本公司。
   运输要求：液氮或干冰保存寄送，广州本地客户可上门收样。
   注：样本应避免各类污染和反复冻融。
 
六、辉骏生物实验报告内容
    1、蛋白质鉴定和SILAC定量分析结果；
    2、顾客指定蛋白质对应的质谱峰图；
    3、SILAC实验完整的实验步骤、使用仪器、软件检索参数等。
 
七、辉骏生物质量承诺
    1、严谨的SILAC实验设计方案确保定量分析结果可靠；
    2、提供客观的SILAC实验分析结果。