NOS基因核酸检测试剂盒（恒温荧光法）使用说明书

NOS基因核酸检测试剂盒（恒温荧光法）

◆ 产品说明

转基因检测系列基于独特的恒温荧光检测技术，可针对食品、饲料等样品中转基因成分的特异核酸片段进行扩增，仪器实时监测扩增过程中的荧光信号变化，自动判读结果。本产品用于NOS基因的检测，检出限为0.1%。

◆ 产品组成（48测试）

◆ 适用仪器

Dhelix-1610、Dhelix-3210、ESE Tube Scanner、Genie II、Deaou-308c等恒温荧光检测仪， ABI 7500，LightCycler480，CFX 96等荧光PCR仪。

◆ 自备耗材和仪器

①灭菌1.5mL或2.0mL离心管；②灭菌0.2mL PCR管或八联管；③冰盒；④移液器（0.5-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套灭菌吸头；⑤离心机；⑥涡旋混匀器；⑦金属浴；⑧均质机、搅拌机或研钵等研磨器具；⑨电子天平。

◆ 注意事项

1．本试剂检测灵敏度高。为了防止污染，实验要分区操作。

   1）第一区：试剂准备区。

   2）第二区：样本制备区。

 3）第三区：模板添加区。

   4）第四区：扩增及产物分析区。

   ★ 分区之间最好进行物理性隔离，避免人为因素造成的污染。

2．实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，不同区域独立使用工具，需更换手套和实验服。

3．严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。

4．反应液中的成分对光敏感，应避光保存。试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心30秒，并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。

5．反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，开盖易造成气溶胶污染，禁止开盖。

6．不同批号试剂请勿混合使用，在有效期内使用。

◆ 样品处理

参照《GB/T 19495.3-2004 转基因产品检测 核酸提取纯化方法》或其他标准处理样品，除了处于食物和（或）饲料链起始端的农产品和粗加工材料（如粉碎的产品），大多数工业加工的食品经过了物理、化学及酶的处理。这些处理会降低DNA的含量及纯度。因此，每一方法的适用性及重复性会随特异样品而异，一种特定的DNA提取方法的性质特征依赖于被研究的食品种类。实验室样品的代表性应符合《GB/T 19495.7-2004 转基因产品检测 抽样和制样方法》。制备的样本保存待用。

详细步骤请按照标准操作或查阅食安通软件。

★  若使用非一次性研磨器研磨样品，一定要彻底清洗研磨器并充分干燥后再进行下一份样品的研磨，防止交叉污染。

◆ 实验操作

将试剂完全解冻，各组分离心30s。

1. 试剂配制（试剂准备区，放置于冰盒中进行）：

若有N个待检样品，则参照下表，按照N+2个数量计算各组分用量（N个待检样品+1个阴性对照+1个阳性对照），将反应液置于0.6ml或者1.5ml离心管中，涡旋混匀，离心30秒，分装于0.2ml PCR管中，并向每管加入1滴C-I（约20μl）。

1. 模板制备（样本制备区）

   建议使用配套植物基因组DNA提取系列产品，具体过程详见产品说明书。

3．添加模板（模板添加区，放置于冰盒中进行）

在步骤1中已含有反应液的PCR管中加入2μL模板，顺序为NG-I、待测样品模板、PG-NOS-I。涡旋混匀30s，离心1min，立即进行扩增反应。

4. 扩增反应（扩增及产物检测区）

   ①恒温仪器63℃条件下反应60min。

   ②若使用荧光定量PCR仪，则荧光基团选择FAM，淬灭基团选择None，将63℃ 15 s，63℃ 45 s

作为一个循环，于63℃ 45 s处收集荧光信号，60个循环。 

   其他仪器请参照仪器说明书进行设置。

◆ 结果判定

①仪器自动判定结果，若显示“阳性”，则样品中含有NOS基因；若显示“阴性”，则样品中不含有NOS基因或含量低于检测限。

②在荧光定量PCR仪上，根据有无“S”型扩增曲线判定结果。若有“S”型扩增曲线，则样品中含有NOS基因；若无“S”型扩增曲线，则样品中不含有NOS基因或含量低于检测限。

• NG反应管结果显示“阴性”，PG反应管结果显示“阳性”，此次检测结果有效，否则无效。如重复检测结果仍为无效，请与技术支持人员联系。