知识分享：PLM-Puromycin试剂说明书

一、产品概述：

 

产品名称: PLM-Puromycin 试剂      产品货号：FH880802 

规格：100μl（标准规格）          浓度：1ug/ul 

推荐使用浓度：1-10 μg/ml      

有效期至：

 

二、产品原理：

 

PLM-Puromycin试剂是一种由链霉菌中获取的氨基糖苷类抗生素，具有与tRNA分子3’末端类似的结构，可以和核糖体的A位点结合，从而抑制蛋白质合成对革兰氏阳性菌产生抑制作用。可用作筛选含该抗生素的基因质粒，细胞株构建，也可当做抗菌类抗生素使用。

 

三、储 存：

 

保存条件： -20℃或4℃避光保存，尽量避免反复冻融。   

运输条件：4℃以下低温运输

 

四、使用说明：

 

以验证目的质粒是否具有Puromycin 抗性为例说明本试剂的应用：

 

      1.  转染前一天铺HEK293细胞，培养基为含10% FBS 的DMEM培养基，以6 well plate为例，细胞数目约为0.5x10⁶ cells。

 

      2.  在无菌管中加入目的DNA质粒（1-2 ug）及无血清的DMEM或者Opti-MEM。

 

3.在无菌管中加入无血清的DMEM或者Opti-MEM及本公司VGF转染试剂4 -10 ug。

 

4.将2和3步中的溶液混合，室温放置20-30min。

 

5.将4步所得混合液逐滴加入至6 well plate中。

 

6.转染48h后，吸弃完全培养基，加入终浓度为1-10 ug/mlPLM-Puromycin试剂的完全培养基2ml。

 

7．再培养48h后，观察细胞状态，不含嘌呤霉素的细胞会飘起死亡，转入含嘌呤霉素抗性质粒的细胞则贴壁生长。再次吸弃完全培养基，加入终浓度为1-10 ug/mlPLM-Puromycin试剂的完全培养基2ml，继续杀死无嘌呤霉素抗性的细胞。

 

8.再培养48h，若细胞仍然贴壁生长且几乎长满，结果说明我们的目的质粒含有嘌呤霉素抗性基因，否则目的质粒不含嘌呤霉素抗性基因。

 

注意事项：筛选细胞时，细胞接种密度不能过大，以免影响筛选效率。当细胞密度比较大时，可加本试剂反复筛选，直至对照细胞完全死亡。建议的一般哺乳动物细胞选用的有效浓度范围为1-10 μg/ml,使用前要做浓度筛选，选择最佳浓度。

 

声明：本试剂仅供于我公司的产品搭配使用，和其他公司产品搭配使用所产生的一切后果均与我公司无关，本产品的最终解释权归我公司所有。