琼脂糖凝胶4B使用说明

琼脂糖凝胶4B

琼脂糖凝胶4B是用4%浓度琼脂糖制备成的球型颗粒，作为凝胶层析介质使用。

1 理化指标

 *检测条件： 层析柱10mm×300mm  *柱床高5cm，25℃，流动相为0.1mol/LNaCl。

2 贮存

产品应密封贮存在4℃~25℃（保存溶液为20% 乙醇），通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。用过的柱子贮存在4℃（20% 乙醇）。保质期：5年。

3 应用

本产品为传统的琼脂糖介质，非特异性吸附低，回收率高，可多次重复使用等特点，用于分子量差异大、对分辨率要求不高的样品的凝胶层析纯化。

3.1 装柱

（1）让所有的材料和试剂达到室温。配制缓冲液。

（2）根据柱子大小取所需量的凝胶，用去离子水清洗掉20%乙醇，用缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。

（3）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位，务必使底端无气泡。

（4）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

（5）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定（注意压力不要超过填料最大耐压）。

3.2 平衡

让缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。

建议使用离子强度为0.15或更大的缓冲液，以避免溶质分子和基质之间的任何不需要的离子相互作用。对于各Sepharose凝胶的推荐流速，请参考推荐流速越低，分离度越高。

3.3 上样

（1）样品用平衡液配制，样品一定要离心或过滤后上样。 

（2）推荐的样品体积为总床体积的2-5%。

3.4 洗脱

用缓冲液洗脱，洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。

3.5 再生

一般用缓冲液洗到平衡，可再次使用。

在一些应用中，诸如变性蛋白质或脂质的物质在再生过程中洗脱不掉。 这些可以使用下述步骤清除。

出现下面这些情况，是必须需要清洗再生的：

（1）背压增加；

（2）色谱柱顶部的颜色变化；

（3）分辨率降低；

（4）转换接头和凝胶表面之间出现空隙。

如果观察到增加的背压，在开始柱清洁程序之前先检查管路中的各个过滤阀、过滤膜是否被污染；

通过用0.1M NaOH以推荐线性流速洗涤柱子，除去沉淀的蛋白质，非特异性结合的蛋白质和脂蛋白。

3.6 注意

在装柱、使用和保存柱子的时候，始终要避免柱子流干气泡进入。

注意事项：

1.上样之前，样品必须经过膜过滤及去除色素，否则杂质及色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。

2.在使用过程中，避免使用高浓度的强酸强碱，酸和碱的浓度应低于0.15摩尔。碱会使流速变慢。

3.不同的样品，吸附和洗脱方法不相同，可以根据相关的文献进行。