猪源性成分核酸检测试剂盒（恒温荧光法）使用说明

猪源性成分核酸检测试剂盒（恒温荧光法）

请于-20℃条件下保存，有效期 12 个月

◆ 产品说明

 物种鉴定系列基于独特的恒温荧光检测技术，可针对食品、饲料等样品中动物源性成分的特异核酸片段进行扩增，仪器实时监测扩增过程中的荧光信号变化，自动判读结果。本产品用于猪源性成分的检测，检出限

为 0.5%。

◆ 产品组成（48 测试）

 

	021011M
试剂	含量
A-Sus-I	1200μL Χ1 支
B-I	55μL Χ1 支
C-I	1200μL Χ1 支
NG-I	50μL Χ1 支
PG-Sus-I	50μL Χ1 支

 

◆ 适用仪器

 

ZYD-S1、ESE Tube Scanner、Genie II、Deaou-308c 等恒温荧光检测仪， ABI 7500，LightCycler480，CFX 96

 

等荧光 PCR 仪。

 

◆ 自备耗材和仪器

 

①灭菌 1.5mL 或 2.0mL 离心管；②灭菌 0.2mL PCR 管或八联管；③冰盒；④移液器（1-10μL，10-100μL，100-1000μL）

 

及配套灭菌吸头；⑤离心机；⑥涡旋混匀器；⑦金属浴。

 

◆ 注意事项

 

1．本试剂检测灵敏度高。为了防止污染，实验要分区操作。

 

1）第一区：试剂准备区。

 

2）第二区：样本制备区。

 

3）第三区：扩增及产物分析区。

 

★ 分区之间最好进行物理性隔离，避免人为因素造成的污染。

 

2. 实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，使用移液器，试验产生的所有废弃物及时处理。

 

3．严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰上操作。

 

4．反应液中的成分对光敏感，应避光保存。试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心 30

 

秒，并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。

 

5．反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，开盖易造成气溶胶污染，禁止开盖。

 

6．不同批号试剂请勿混合使用，在有效期内使用。

 

◆ 样品处理

 

参照《SN/T 3730.-2013 食品及饲料中常见畜类品种的鉴定方法 第 8 部分：猪成分检测 实时 荧光 PCR 法》或其他标准处理样品，制备的样本保存待用。

 

①样品的采集和制备是动物源性鉴别的重要步骤，为防止交叉污染，应使用一次性消耗品，研钵应经 160℃干烤 2 h，其他不宜干烤或高压处理的器皿应使用 1%次氯酸钠溶液浸泡。②取样应尽量采取肌肉组织，对于同一批样品，应多点采集合并后，作为一份样品进行均质，提取 DNA。③采样过程应快速完成，将采取的样品迅速放入组织搅碎机中进行均质成糜状，充分混匀，取 0.1 g 充分混匀的样品，采用液氮研磨或均质器均质。

 

详细步骤请按照标准操作或查阅食安通软件。

◆ 实验操作

 

将试剂完全解冻，各组分离心 30s。

 

1. 试剂配制（试剂准备区，放置于冰盒中进行）：

 

若有 N 个待检样品，则参照下表，按照 N+2 个数量计算各组分用量（N 个待检样品+1 个阴性对照+1 个阳性对照），将反应液置于 1.5mL 或者 2.0mL 离心管中，漩涡混匀，离心 30 秒，分装于 0.2mL PCR 管中，并向每管加入 1

   滴 C-I（约 20μL）。

 

 

 

 

 

 

2．模板制备（样本制备区）

 

试剂 使用量

 

A-Sus-I 22Χ(N+2)μL

 

B-I 1Χ(N+2)μL

 

 反应液总体积   23Χ(N+2)μL