UniGel高载量离子交换介质的特点和应用

浏览次数：7015　发布日期：2018-2-1　来源：本站　仅供参考，谢绝转载，否则责任自负

UniGel：高载量离子交换层析的新选择

UniGel 高载量离子交换介质采用区别于传统离子交换层析基质的表面修饰技术，运用特殊的延长臂和键合技术，使其载量获得极大提升。离子交换（IEX）是根据生物分子表面电荷（种类、数目和分布）差异实现对不同生物分子的分离的方法。常规的离子交换层析介质是通过直接在介质表面键合离子交换基团的方法来发挥作用，导致载量较小。UniGel 高载量离子交换介质采用区别于传统离子交换层析基质的表面修饰技术，运用特殊的延长臂和键合技术，使其载量获得极大提升。

UniGel-30DEAE

单分散聚丙烯酸酯电镜图片

UniGel高载量离子交换介质的特点

超高动态结合载量

提供30μm和80μm两种粒径，提供从中度纯化到精细纯化的分辨率选择

填料装柱压缩系数更小（=1.05），远低于琼脂糖和葡聚糖凝胶

设计更灵活，允许更高流速和床高度，易于优化放大

更优越的耐碱性，允许更多次地再生和延长使用寿命

更高的生产效率和更低的成本，提升企业收益

应用范围

UniGel系列高载量离子交换填料主要应用于抗体、蛋白质、多肽等生物大分子的高载量捕获和大规模纯化。尤其是标签蛋白的三步纯化、抗体三步纯化。

表UniGel产品基本属性特征

化学稳定性测试 Stability Test

（一般根据不同产品使用环境来设计）

Uni系列化学稳定性测试结果

层析柱或预装柱介绍

装柱流程或方法

装柱方法

1) 首先计算所装色谱柱的柱体积 Vc， Vc=Ac × L， Ac=π × r2。

* Vc：色谱柱柱体积；Ac：色谱柱横截面积；L:色谱柱高度；r：色谱柱半径。

2) 在原容器中轻轻搅动离子交换层析介质，使其完全分散在液体中形成匀浆液。量取所需原液的质量或体积*。

* 一般情况下，离子交换层析介质在压力作用下都会被压紧导致体积收缩，为了获得紧密的柱床，推荐介质的体积过量一些，一般为柱体积的 1.2 倍左右。

3）倾出介质中 20%乙醇保存液，用 0.5 M NaCl 溶液置换 20%乙醇，平衡过夜。

4）装柱之前，用 0.5 M NaCl 溶液调整匀浆浓度为 65 ~ 70%；将匀浆一次性倒入层析柱，沉降平衡后标注高度。

5）将分配器装入，调节高度使得压缩系数为 1.05 ~ 1.10；然后启动输液泵，用 1.5~2 倍工作流速使柱床稳定（-2 柱体积）。

6）按照 SOP 进行柱效和对称性的测定，须达到预定标准。

柱效测定

装好的色谱柱应使用 2 BV 0.5 M NaCl 溶液平衡，再用 2.0 M NaCl 以 100 cm/h 流速进行柱效测试，具体测试参数详见下表：

存储条件

暂时不使用的层析介质需保存在 4～35 ℃ 的 20%乙醇中，并盖紧瓶盖，已经装好层析柱应保存在含 20%乙醇的缓冲液(pH 7.0)中。

清洗方法

为了保持层析柱的性能，若有蛋白质或其他杂质在再生过程中未能有效去除，可执行在位清洗步骤，在位清洗时，也可采用反向冲洗的方法，具体操作步骤如下：
（1）对于通过离子键结合过强的蛋白，可用 3 BV 以上的 2 M NaCl 清洗，并用 3 BV 以上的去离子水清洗；
（2）对沉淀蛋白、以疏水性结合的蛋白或脂蛋白，可用 0.2~0.5 M NaOH 清洗（与层析介质接触时间 1~2 小时），并用 5 BV 以上平衡液和 3 BV 以上的去离子水清洗；
（3）对强疏水性结合的蛋白、脂蛋白和脂类物质，可用 5 BV 以上的 50%乙醇或 30%异丙醇清洗（与层析介质接触时间 0.5-1 小时），并用 5 BV 以上的去离子水清洗。也可用含非离子表面活性剂的碱性或酸性溶液清洗，如用 0.1~0.5%的 Triton X-100 + 0.1 M 乙酸清洗 1-2 小时，并用 5 BV 以上的 50%乙醇冲洗去除去污剂，然后用 5 BV 以上的纯水冲洗（使用高浓度的有机溶剂时，为了避免产生气泡，应采用逐步增加有机溶剂浓度的方法）。

再生方法

每次层析之后可用 0.5-2 M NaCl 清洗层析柱，除去强结合于层析介质上的蛋白。

UniGel系列载量测试

UniGel系列产品的优势就是高载量高流速，通过对比同类产品，我们可以更直观了解UniGel系列的载量优势。

1.UniGel与传统离子交换介质

动态载量的对比