冰冻切片神经元高尔基法染色试剂盒使用说明

冰冻切片神经元高尔基法染色试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

YIJI冰冻切片神经元高尔基法染色试剂是一种旨在使用亲银还原技术，分析固定处理的冰冻组织切片中神经元（neuron）、锥体细胞（pyramidal cell）、胶质细胞（glia cell）、少突触胶质细胞（oligodendrocyte）和其它突起（process）尤其树突（dendrites）形态学的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良传统方法、成功实验证明的。主要适用于冰冻脑组织或外周神经组织切片的相关神经细胞检测。广泛用于动物脑神经病理生理解剖学的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。

技术背景

意大利科学家高尔基（Camillo Golgi）于1873年发明了神经细胞黑色反应的浸银染色技术，从而开辟了神经系统形态结构、演变、单系发生、构建以及疾病等学科研究，并建立了神经学说。脑神经组织经固定，亲银染色后，呈现部分神经细胞完全染色，而其它神经细胞没有任何着色的高度选择性染色。

产品内容

YIJI固着液（Reagent A）  毫升

YIJI氧化液（Reagent B）  毫升

YIJI营养液（Reagent C）  毫升

YIJI强化液（Reagent D）  毫升

YIJI脱水液（Reagent E）  毫升

YIJI清理液（Reagent F）  毫升

YIJI染色液（Reagent G）  毫升

产品说明书  1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，避免光照；有效保证3月

用户自备

1.5毫升离心管：用于工作液配制的容器

无菌手术刀和镊子：用于解剖动物脑组织

小型玻璃染色缸或60毫米玻璃培养皿：用于组织切片处理的容器

火棉胶（collodion）：用于保护固着处理后的组织样品

切片机：用于组织切片

明胶化载玻片和盖玻片：用于切片后铺片

中性树脂：用于切片封片

光学显微镜：用于切片染色后观察分析

实验步骤

• 样本固着处理

• 常规麻醉动物和手术（建议：使用生理盐水由心脏处灌注三次，每次60毫升，去除血液直至澄清）
• 使用适量的YIJI固着液（Reagent A）灌注处理
• 即刻小心取出脑组织
• 小心放进到xx毫升YIJI固着液（Reagent A）里
• 室温下浸泡孵育1小时
• 用无菌手术刀将脑组织切成0.5厘米厚的组织块
• 即刻用无菌镊子夹起组织块 
• 小心转移到xx毫升YIJI氧化液（Reagent B）里（20毫升/2块组织块）
• 室温下浸泡孵育2周，避免光照
• 小心转移到xx毫升YIJI营养液（Reagent C）里
• 室温下浸泡孵育48小时，避免光照
• 小心转移到xx毫升YIJI强化液（Reagent D）里
• 室温下浸泡孵育48小时，避免光照（注意：可以孵育1周）
• 用绵纸吸干组织快
• 使用30％蔗糖处理、OCT包埋或使用用户自备的火棉胶（8％collodion）包埋
• 放进－20℃冰箱里
• 取出组织块，在－20℃条件下进行缓慢冰冻切片，为20至100微米厚，并铺片在明胶化载玻片上
• 置于－20℃冰箱里保存

• 样本染色处理

• 取出待测的20至100微米厚的冰冻组织切片 
• 小心加上xx微升YIJI脱水液（Reagent E）在切片上，铺满整个样品表面
• 室温下孵育2分钟
• 小心移去切片上的YIJI脱水液（Reagent E）
• 重复实验步骤2至4一次
• 室温下，小心将切片置入xx毫升YIJI清理液（Reagent F）中孵育2分钟
• 小心移去切片上的YIJI清理液（Reagent F）
• 小心加上xx微升YIJI染色液（Reagent G），铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育48小时，直至呈现黑色，即刻终止，避免光照（注意：期间可以在显微镜下观察；避免干化）
• 小心移去切片上的YIJI染色液（Reagent G）
• 室温下，小心将切片置入xx毫升YIJI清理液（Reagent F）中孵育2分钟
• 小心移去切片上的YIJI清理液（Reagent F）
• （选择步骤）进行复染操作（建议使用YIJI甲苯酚紫（CRESYL VIOLET）复染试剂盒－YIJI80052）
• 透明处理
• 放上盖玻片或封片（中性树脂）
• 即刻在一般光学显微镜下观察：神经元、锥体细胞、胶质细胞、少突触胶质细胞（椭圆形如同串珠）和其它突起，呈现黑色（如果复染――细胞核呈现蓝色，胞浆尼氏（体）物质呈现粉红至紫色）

注意事项

• 本产品为20次操作
• 操作时，须戴手套
• 铺片须使用明胶化载玻片，否则染色会掉片：第一用毛笔涂刷；第二保持湿润3小时；第三用PARAFIN包裹后压片
• 切片建议100至200微米，过厚和过薄不利于检测神经细胞
• 有的组织采用冰冻切片易破碎，建议第一调整切片温度；第二切片厚度在150微米以上；如果无法解决，建议使用石蜡切片等
• 建议使用玻璃染色缸
• 每次更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干
• 试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面
• 整个操作，在避光状态下进行
• 染色完成后，即刻进行光学显微镜观察 
• 样品染色后保存，避免光照
• 本公司提供系列组织细胞神经系统成分染色试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定显色清晰