原代细胞培养中的六个错误做法【赛百慷原创】

原代细胞培养与细胞株不同，两者在培养过程中的操作方法也不一样。这里对原代细胞操作过程中容易出现的6个错误及对应方法做一个说明。

1.长时间水浴解冻

因为原代细胞非常容易受到解冻过程的影响，所以在37℃水浴锅中解冻时，要在水中摆动溶解。在细胞半溶后（不要等到全部溶解），迅速拿到生物安全柜或超净台中，用1ml的枪，抽出事先准备好的完全培养基打入冻存管中，然后抽到培养瓶中，反复进行，直至完全溶解

2.把冻存管的细胞溶解后迅速离心
如果原代细胞溶解后马上离心，细胞所受的打击可能比DMSO的毒性还要大，不建议采用这个方法。用带有血清的完全培养基溶解后铺瓶，第二天换液去除DMSO。

3.让原代细胞长满（100%）瓶（皿、板）
原代细胞长满后，细胞会出现老化。因为原代细胞不是100%的细胞团，把混入的细胞控制在最小限度非常重要。建议细胞长到90-95%进行传代

4.传代时用大量的胰蛋白酶处理
原代细胞传代时，要用低浓度的胰蛋白酶消化，在显微镜下看到细胞开始变圆、脱落后迅速终止胰蛋白酶。建议采用含10%血清的完全培养基终止或大豆由来的蛋白酶终止剂终止。

5.细胞培养后再冻存
原代细胞再冻存后，细胞会老化、也可能引起机能变化，所以不建议再冻存。细胞再冻存也是细胞死伤的主要原因。

6.原代细胞无限增殖

原代细胞和细胞系不同，增殖能力是有限的。为了防止遗传上的变化，最好尽快开始做实验。另外，为了防止混入杂细胞比例的增加，要经常观察细胞形态。