小鼠脾脏树突状细胞的分离方法简介

小鼠脾脏DC是研究最多的淋巴组织DC，其特征为组成性表达MHC-II类分子和CD11c。该细胞群可进一步分为三群：主要分布于边缘区的CD4+CD8-CD11b+DC，主要分布于T细胞区的CD4-CD8+CD11b-DC和双阴性DC----CD4-CD8+CD11b+。其中，CD8+DC表达CD1d和DEC-205。我们可以根据需要选择不同的方法将脾脏DC分选出来。

     小鼠脾脏DC在体外可黏附于玻璃或塑料表面，但培养18-24h后，其黏附能力丧失，借此可与巨噬细胞分离。该方法无需特殊试剂，不需要进行密度梯度离心，操作简单、省时。但用此方法获取的DC数量少，纯度低，而且分离所得的DC处于不同的分化阶段，无法满足精细实验的需要。

     CD11c表达于所有已知小鼠DC表面，所以将包被了磁珠的CD11c抗体与小鼠淋巴组织或非淋巴组织悬液共孵育并置于磁场后，结合了CD11c抗体的细胞将留在分选柱中，脱离磁场后可分离得到CD11c阳性的DC。该方法简单易行，若操作得当，细胞纯度可以达到95%以上。但需购置相应分选设备及试剂，花费较高。

    DC表面表达多种相对特异性的表面标志，可根据实验需要，选用某些特定表面标志的单克隆荧光抗体作标记，明确目的细胞群，通过流式细胞仪做自动分选。
该方法可以根据多个标记进行细胞分选，弥补了MACS分选的不足，而且分离得到的DC细胞纯度更高。但是采用FCM分选目前存在的主要问题是DC的种类很多，发育的过程和表面特征标志目前尚未完全清楚。因此，在做DC分离时，必须视标本来源及目的细胞选择合适的单克隆抗体精选标记。另外，进行流式分选必须购置具有分选功能的流式细胞仪，价格昂贵，对操作人员的技术也有较高要求。