蛋白质技术专题：核蛋白的免疫荧光定位实验

免疫荧光技术又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种免疫荧光技术。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。

实验方法
免疫荧光定位法
实验方法原理 免疫荧光细胞化学技术是采用荧光素标记的已知抗体（或抗原）作为探针，检测待测组织、细胞标本中的靶抗原（或抗体），形成的抗原抗体复合物带有荧光素，在荧光显微镜下，由于受高压汞灯光源的紫外光照射，荧光素发出明亮的荧光，这样就可以分辨出抗原（或抗体）的所在位置及其性质，并可利用荧光定量技术计算抗原的含量，以达到对抗原物质定位、定性和定量测定的目的。 
实验材料 核蛋白 
试剂、试剂盒 甲醇 PB 一抗 二抗 
仪器、耗材 显微镜 玻片 盖玻片 滴管 
实验步骤 1.  在22×22 mm 的1.5号盖玻片上培养细胞。理想条件下细胞应长到50%~70%汇合。

2.  在-20℃用100%甲醇固定细胞3分钟。

3.  用PBS + 1% NGS洗三次，每次10分钟。

4.  在湿盒里以适当浓度的一抗室温温育1小时。

5.  用PBS + 1% NGS洗三次，每次10分钟。

6.  在湿盒里与稀释为4 ug/ml 的荧光标记二抗室温温育1小时。

7.  用PBS洗四次，每次10分钟。

8.  用封片剂将盖玻片封在载波片上，用干净的指甲油将盖玻片封边，防止盖玻片滑动。
收起  
注意事项 1.  要在盖玻片一边角落做记号，以知道细胞在盖玻片的那一面。

2.  一抗的浓度需要经过实验摸索确定。

3.  第四步中如果用22×22 mm 盖玻片，则在盖玻片上加30 ul 稀释的抗体，并且将盖玻片倒置在玻璃载玻片上，然后将载玻片放到湿盒里，在室温温育