蛋白质技术专题：血浆游离血红蛋白测定
实验原理
血红蛋白具有类过氧化物酶活性，可催化H2O2释放新生态氧，使邻甲联苯胺氧化发生颜色变化，由无色最终变为蓝紫色。根据显色深浅与标准进行比较，可测出其含量。
实验方法
材料：
1．2g/L邻甲联苯胺溶液
2．1%H2O2
3．10%醋酸溶液
4．分光光度计
方法：
1.抽取静脉血2-3ml，枸橼酸钠抗凝，离心分离血浆。
2．按下表进行操作，用分光光度计，波长为530nm，以空白管调零，测定测定管的吸光度。
3.计算公式
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试剂 （ml） |
测定管 |
空白管 |
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2 g/L邻甲联苯胺溶液 |
0.5 |
0.5 |
|
患者血浆 |
0.02 |
/ |
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1% H2O2 |
0.5 |
0.5 |
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混匀后室温放置10min | ||
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10%醋酸溶液 |
5.0 |
5.0 |
|
室温放置10min | ||
3.计算公式
血浆游离Hb(mg/L)=测定管吸光度/标准管吸光度×100
实验结果计算
参考范围：0-40mg/L
注意事项
1.一切容器避免血红蛋白污染；
2.采血要顺利，器皿要干燥，检测血浆要新鲜，及时分离，防止人为溶血；
3.邻联苯胺溶液具致癌性，检测时要小心，废液要妥善处理，以免污染；
4.双氧水要新鲜配置，浓度要准确。
