细小病毒B19 IgM ELISA试剂盒使用说明书

DRG 细小病毒B19 IgM ELISA试剂盒
（德国DRG原装进口，货号：EIA3504）

 

DRG公司的吸小病毒B19 IgM酶免试剂盒可用于人血清中抗细小病毒B19 IgM抗体的定性和定量检测。此试剂盒仅供体外诊断用，在美国，此试剂盒仅供研究用。

 

2、实验原理
DRG公司的细小病毒B19 IgM ELISA试剂盒是一种固相的酶联免疫吸附实验，包被板的微孔中包被了重组的细小病毒B19抗原）。将稀释好的病人样品和即用型的质控品加入到微孔中，温育期间，阳性样品和质控品中的细小病毒B19特异性抗体会结合到固相抗原上。洗板除去未结合的样品，再微孔中加入辣根过氧酶标记的抗人IgM抗体。在第二次温育中，IgG酶联物会结合到这些特异性的IgM抗体上而产生酶联免疫复合物。第二次洗板除去未结合的酶联免疫复合物。加入TMB底物液后，溶液显示蓝色。之后加入终止液终止酶促反应，此时容易由蓝色变成黄色。溶液所显示的颜色强度与样品中细小病毒B19特异性IgM抗体的浓度成反比，450nm处读取OD值。

4、样品
此实验中将用到血清，不能使用溶血、黄疸血或脂血样品。

1.        样品的采集，血清，静脉穿刺采集全血，待其凝血，在室温下用离心机分离血清。未完全凝血前请勿离心，接受了抗凝剂治疗的病人样品可能需要更长的凝血时间。

2.        样品的储存：必须盖住样本并在实验之前于２-８℃下可贮存至24小时。样品需要更长的贮存时间，必须在实验之前于-20℃下一次性冻存。融化的样本在检测之前必须要上下倒置几次。

3.        样品的稀释：实验开始前，用零标准品按1：100的比例稀释样品。10μL样品+1ml样品稀释液，混合，静置15分钟，混合均匀。注意：质控品是即用型的，不必稀释。

 

5、实验步骤
实验开始前，按照稀释步骤稀释好洗涤液，准备好样品，确定样品和标准品的数量。

1.        将所需数目的板条置于板架上，实验至少做以下几孔。

1孔（如A1孔），用来做空白孔
1孔（如B1孔），用来做阴性质控
2孔（如C1+D1），用来做临界质控
1孔（如E1），用来做阳性质控
用户自己决定质控品和样品是否做双孔。

1.        在所有的微孔中加入洗涤液，浸泡5分钟。弃取孔内反应液，吸水纸上拍干以除去残余液体。

2.        在B1孔内加入100ul阴性质控，

在C1和D1孔内分别加入100ul临界质控
在E1孔内加入100ul阳性质控
在相应的样品孔内分别加入100ul稀释好的样品，A1空白孔不用加。

1.        盖板，室温温育(22-25℃)60分钟。

2.        弃去孔内的反应液。用稀释好的洗涤液洗板3次（每孔300ul），在吸水纸上把板拍干以除去残余液体。注意：洗板步骤是否正确会明显影响实验的灵敏度和精密度。

3.        加100μl的酶联物于各孔中，除A1孔。

4.        盖板，室温温育(22-25℃)30分钟。

5.        弃去孔内的反应液。用稀释好的洗涤液洗板3次（每孔300ul），在吸水纸上把板拍干以除去残余液体。注意：洗板步骤是否正确会明显影响实验的灵敏度和精密度。

6.        每孔加100μl底物液。

7.        盖板，室温避光温育(22-25℃)15分钟。

8.        每孔加100μl终止液，溶液由蓝色变成黄色。

9.        加终止液后30分钟内在450nm波长读取OD值。

6、实验的有效性
如果实验能满足如下标准则认为实验有效：
空白孔A1：OD值低于0.100
阴性质控B2孔：OD值低于0.200
临界质控（CO）C1/D1：OD值在0.250-0.600之间
阳性质控E1孔：OD值必须大于临界质控
7、结果计算
临界质控平均吸光度值（CO）
计算两个临界质控的平均OD值，如（0.44+0.45）/2=0.445=CO
8、结果说明
阳性：病人样品的平均OD值比临界OD值高20%以上的样品，（病人样品OD＞1.2倍CO）
灰区：病人样品的平均OD值在120%CO和90%CO范围内的样品，（0.9倍CO≤人样品OD≤1.2倍CO＝。将灰区样品重新检测，如果样品OD仍位于灰区，则样品为阴性样品。
阴性：病人样品的平均OD值比临界OD值低10%以上的样品，（人样品OD＜0.9倍CO＝。
 
结果按DRG单位计算（DU）
病人样品平均OD值*10/CO=DU（DRG 单位）
例如：1.580*10/0.445=35DU
结果说明：
临界值：10DU
灰区：9-12DU
阴性：＜9DU
阳性：＞12DU

 

本译文仅供参考，详情请以原文为准。