利用微流体PCR进行准确可靠的单细胞基因表达分析
· 达到更准确地检测单一细胞基因表达谱差异性
· 避免测量样品中所有细胞的平均值的坏处
· 鉴定以前不能分辨的细胞亚群和分解新的调控网络
在名义上均一的细胞群中，单一细胞在尺寸、蛋白质水平和mRNA表达转录上都存在差异，所以默认你的样品中每一个细胞都表现得完全一致是一种危险的赌博，测量集中到一起的多个细胞的平均值会掩盖细胞之间基因表达的显著差异。在看起来均一的细胞群中辨别细胞间的差异对于促进干细胞研究、理解癌细胞、鉴定免疫反应、研究生物治疗的有效性、发现退行性神经疾病的机理等方面都有至关重要的意义。
遗传学家和临床工作者一直在寻找一套完整的实验流程来检测分辨单一细胞，根据它们独特的基因组和转录组进行分群，同时将技术的噪音最小化。
Fluidigm基于微流体技术开发了一种全新的单细胞基因表达检测方法，可以使你快速可靠地分离、处理、对单一细胞的基因组进行分析。我们的仪器、芯片、试剂、软件、试剂盒组成的一套产品线家族,利用Fluidigm设计的产品能帮助您只需采用一种技术即可完成细胞分离提取、逆转录和预扩增、到最终监测和分析细胞活动等一系列实验流程。
Fluidigm单细胞流程可以在几个小时内测试数以百计的单细胞中数百个基因的表达，这种实验用传统的系统通常要用几天的时间。它提供简便的流程和灵活的试剂组合。利用自动化的流程、随时可用的试剂和优化的芯片，您可以免除繁重的加样和样品混合步骤而达到“加样走人”的生产率。
Fluidigm的微流体芯片结构可以利用比传统体系显著少量的试剂自动完成样品与试剂、引物探针的混合并建立数以千计的PCR反应体系。每个微流体芯片可以生成相当于24块标准384-孔板数据量。
新的Fluidigm单细胞流程为研究细胞分化、测量单一细胞对特定刺激的反应、证实重要疾病生物标志物、验证RNA干扰沉默基因表达和实行候选药物筛选等开启了新的大门。
该流程的技术平台为Fluidigm新推出的C1单细胞自动制备系统和已在单细胞基因表达分析中广泛被采用的BioMark™ HD微流体PCR系统组成。
C1™单细胞自动制备系统
1 小时内即可分离制备96个单细胞
BIOMARK™ HD系统
30分钟内可进行9,216个 qPCR反应
C1单细胞自动制备系统结合BioMark™ HD系统持续有效地优化了基因表达分析，支持多达96个单一细胞的96个转录子的分析。显著地提高了效率并进一步加速了单细胞基因表达谱的研究。
整个流程可以让您轻松实现如下步骤：
· 捕获—组细胞只需一步加样即能迅速地分离到96个独立的反应仓完成制备
· 确认—质控节点确认捕获细胞数量及分辨活细胞和死细胞
· 裂解—快速直接的细胞裂解方法可节约时间和费用且不需要RNA纯化步骤
· 逆转录和预扩增—cDNA合成及特异目的片段扩增在一个样品中进行且不需要试剂混合及样品转移
· 收获—所有扩增产物被集中到一起、收集和转移到BioMark™ HD系统进行实时PCR分析
· 转移—在C1系统上预扩增的产物被稀释加样到动态芯片IFC上
· 定量PCR-将动态芯片IFC放到BioMark™ HD系统上进行PCR反应和数据采集等
· 分析—用户友好界面的软件包可实时查看扩增曲线、获取彩色色热图及Ct数据等
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