酵母双杂交一对一互作验证

原理简介

　　酵母转录因子GAL4包括两个结构域，分别为DNA结合结构域（DNA-binding domain，BD）和转录激活结构域（Activating domain，AD）。BD能够识别位于GAL4-responsive gene的上游激活序列（Upstream activating sequence，UAS）并与之结合，AD可以启动UAS下游的基因进行转录。当BD或AD单独作用时不能激活转录，只有AD和BD在空间上充分接近时，GAL4转录因子才具有活性并激活下游基因的转录。
　　该技术利用酵母转录因子GAL4的特性，将AD与X蛋白融合，BD与Y蛋白融合，如果X、Y互作形成蛋白复合物，那么AD与BD会在空间上充分接近，使GAL4转录因子激活并启动报告基因的转录。

实验流程

　　①AD与BD载体构建：目的基因克隆或目的基因合成；限制性内切酶酶切骨架载体并纯化；目的基因插入骨架载体；转化大肠杆菌，筛选阳性克隆并测序鉴定；
　　②共转酵母细胞：将目的AD载体与BD载体共同转化到酵母细胞中；
　　③二缺培养基培养转化的产物：将共转的酵母细胞均匀涂布在二缺板(SD/-Leu/-Trp)上培养；
　　④影印三缺和四缺板：将二缺平板上生长的酵母单克隆影印至三缺板(SD/-His/-Leu/-Trp)和四缺板(SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp)上培养；
　　⑤拍照记录实验结果。

　　技术服务范畴：验证两个已知蛋白质间的相互作用
　　技术服务优势：
　　①团队经验丰富；
　　②交付周期短，提供原始图片，保证数据真实可靠。

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