Cas9基因编辑-基因定点敲入技术服务

  超过百个成功敲入KI案例，苏州阿尔法生物携手海星生物一站式解决细胞基因功能研究纯合/杂合敲入细胞系。

  Cas9-Cell line Knock-In service（Cas9-CKI）基因定点敲入细胞系是Cas9X技术团队针对实验室常用的各种细胞系，研究并确立针对不同的细胞的外源基因或者片段高效敲入（Knock-in, KI）的技术操作规程，主要目的就是：解决KI效率低下和KI片段长度限制的问题。

   目前使用Cas9的进行基因KI研究方法，主要应用在目的基因后面加上标签，对目的蛋白进行定位；再有就是通过对小鼠细胞的目的基因进行修饰替换成为人的基因，用于动物的CDX模型等。KI实现的方案包括：使用合成的Oligo或者ssDNA（single-stranded DNA，ssDNA）作为“Donor”来实现长片段的敲入；也可以通过AAV病毒的方式（其病毒以ssDNA的方式存在于细胞核中）导入ssDNA作为“Donor”载体，也可以通过dsDNA片段或者环状质粒作为“Donor”来实现KI的目的。

     但是不同的细胞模型KI的效率依然不能令人满意，且不同的细胞系之间的效率差异很大，很多细胞无法实现定点的KI。 Cas9X针对不同的片段的长度和不同的细胞特性使用不同的KI策略：小的片段使用Oligo进行KI，再长一点的使用ssDNA进行KI，如果长度超过1Kb的将使用重组的办法进行KI。针对细胞系的KI效率非常低的，需要先构建Cas9稳转细胞株再进行gRNA和Donor的转染来提高KI效率。Cas9X努力优化实验条件满足不同细胞系和不同片段长度的KI服务需求。

Cas9基因编辑- 基因定点敲入 技术服务 为你的细胞探索优化的KI实验方案。



 我们还能为您提供：
基因敲除细胞系服务
基因点突变细胞系服务
基因定点敲入细胞系服务
微生物基因编辑服务
基因敲除Cell Pool服务

 案例分析

  基因敲入项目名称

  构建eGFP基因敲入的人胶质瘤细胞细胞
实验设计

种属：Human； 基因名称：PRNP
gRNA位点：ATCTTCCTGATAGTGGGATGAGG 
Donor载体：5'arm-eGFP-3'arm

[基因敲入技术原理图]

细胞信息

种属：Human； 细胞名称：人胶质瘤细胞U251
培养基：DMEM，10%FBS 
  
细胞检测

无菌检测：合格； 支原体检测：合格
细胞克隆形成率检测：细胞增殖能力较好，克隆形成率较好。 
细胞基因型检测：针对gRNA打靶位置及其附近基因组序列进行测序。测序结果与理论序列一致。 
 
细胞转导                                                           

电转参数：1005V，35ms，2次； 电转体系：10 uL
  
PCR 筛选

筛选克隆数量：160； 阳性数量：10

[电泳示意图]
 

bio-equip.com