外泌体提取服务

Dr.Cell实验室采用超速离心方法从细胞培养上清液、血清、血浆、尿液、脑脊液以及其他体液（腹水、羊水、乳液以及唾液等）中的提取外泌体，获取的高纯度外泌体颗粒，可进行后续的NTA、TEM、WB等分析。

服务类别：	分子与细胞	总访问：	514
最后更新：	2024-6-4	半年访问：	50
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服务商：上海逍鹏生物科技有限公司

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外泌体抽提

样本准备

1、细胞上清 Cell culture supernatant

细胞培养基必须使用去除 exosome的血清（如去外泌体胎牛血清,Exosome depleted Fetal Bovine Serum, VivaCell P/N: C38010050 ）或者无血清培养基，以降低背景值的干扰（牛血清中含有大量牛源外泌体）。
1)细胞在正常含有血清的培养基中培养一定时间，细胞增长至约70%；
2)对于贴壁细胞，去除原有培养基，用PBS洗涤，更换新的含去外泌体血清的培养基或者无血清培养基；对于悬浮细胞，300×g，4℃，10分钟收集细胞，用PBS洗涤，使用不含外泌体的培养基或者无血清培养基悬浮细胞并继续培养；
3)细胞继续培养24-48小时，根据细胞的生长速度确定收取上清时间；
4)收集细胞上清，300×g，4℃，离心10分钟；小心吸取上清，注意避免吸入细胞或者细胞碎片；
5)上清0.22µm过滤，去除细胞碎片、凋亡小体和微囊泡；
6)将上清样本冻存于-80℃。

建议送样量：20ml以上

2、血浆 Plasma

1)取全血至EDTA抗凝管中，轻柔混匀；
2)4°C条件下，2500×g，离心15min，取上清；
3)再次2500×g，离心15min，取上清即为血浆；
4)血浆于-80°C保存。

建议送样量：2ml以上

3、建议送样量：2ml以上

1)将4ml全血置于普通采血管中（注意收集血清样本不要加入抗凝剂）37℃凝固20-30 min；
2)2000×g离心10 min，取上清，淡黄色透明液体即为血清；
3)将血清置于-80°C保存。

建议送样量：2ml以上

4、尿液 Urine

1)无菌容器收集清晨第一次尿液50ml；
2)加入蛋白酶抑制剂混合物（1.67 ml of100mM NaN3, 2.5ml PMSF (2 mg/ml in isopropyl alcohol), 50 µl Leupeptin (1 mg/ml in ddH2O)）；
3)立即处理或置于-80°C保存。

建议送样量：20ml以上

5、脑脊液 Cerebrospinal fluid

1)收集脑脊液，放置冰上静置30min；
2)4℃ ，2000×g，离心10分钟，去除细胞或细胞碎；
3)取上清，立即处理或置于-80°C保存。

建议送样量：10ml以上

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