DNA pull down技术服务

先将含脱硫生物素的DNA pulldown探针结合到链霉亲和素Beads上，再将DNA-Beads和细胞裂解液孵育，这样DNA结合蛋白便一起吸附在Beads上。洗涤掉未结合的蛋白后，再用洗脱液将DNA结合蛋白从Beads洗脱下来，得到DNA pull down产物。DNA-protein复合物既可以用WesternBlot检测已知蛋白，也可以用质谱鉴定未知蛋白。

DNA pull-down技术服务应用背景

DNA pull-down以感兴趣的DNA序列为中心，寻找与该序列结合的蛋白质，最常见的应用是寻找某特定基因启动子区域的转录因子。

启动子通常位于结构基因5'端上游，含有RNA聚合酶特异性结合和转录起始所需的保守序列。

转录因子也称为反式作用因子，是一种DNA结合蛋白，它能够与真核基因的顺式作用元件（如启动子、增强子等）特异性结合来激活或抑制基因表达。转录因子有4个主要结构域：DNA结合域决定了转录因子的特异性，转录调控域（包括激活域或抑制域）决定了转录因子的功能，寡聚化位点使不同转录因子间发生相互作用，核定位信号控制转录因子进入细胞核。

一个基因的启动子通常会结合多种转录因子，寻找启动子序列的特异转录因子，有助于我们理解这些启动子下游的功能基因是如何被调控的。

鼻咽癌的已有研究指出，氯离子通道-3(CLC-3)是一种有应用前景的癌症生物标志物；但是，CLC-3能否作为胃癌的预后生物标志物以及它在胃癌中的作用机制却鲜有报道。

1 免疫组化实验表明CLC-3在胃痦组织中高表达，且与患者不良预后有关

2 RNA-seq分析和细胞实验发现敲除CLC-3抑制细胞增殖和迁移，且影响了PI3K/Akt信号通路的很多基因

3 双荧光素酶实验确定了CLC-3启动子的活性区域

4 DNA pull down MS实验找到了CLC-3启动子活性区域的潜在结合蛋白XRCC5

5 体内DNA探针检测和ChIP-PCR实验都确定了XRCC5蛋白可以结台CLC-3启动子

6 免疫组化实验表明XRCC5和CLC-3的表达呈正相关，且两者高表达指示患者预后不良

7 基因表达/敲除和细胞功能实验结果显示CLC-3的表达和功能受XRCC5的调节

8 CoIP结合质谱实验筛选到了XRCC5的互作蛋白PARP1，体内DNA探针检测发现PARP1也可以与CLC-3启动子结合，XRCC5和PARP1协同调控CLC-3的表达和功能

9 小鼠移植瘤实验表明CLC-3在体内可也以被XRCC5调控，影响肿瘤生长

CLC-3过表达是胃癌不良预后的生物标志物，并且CLC-3可能通过PI3K/AKT信号通路调节细胞增殖和迁移。胃癌中CLC-3过表达的调控机制是：XRCC5结合CLC-3启动子区并增加其启动子活性，并且与PARP1相互作用在转录水平正调控CLC-3的表达。

Gu Z.Y. et al: Overexpression of CLC-3 is regulated by XRCC5 and is a poor prognostic biomarker for gastric cancer. Journal of Hematology & Oncology. 2018. (IF=17.388).
 

       广州辉骏生物科技股份有限公司（原“广州辉骏生物科技有限公司”）成立于2008年，是一家为科研机构提供实验技术的专业公司，尤其擅长于蛋白质组学和分子生物学等技术。经过10多的不断努力与开拓进取，随着公司规模不断扩大，总部已经成功入驻广州黄埔区科学城国家级科技企业孵化器。
 

　　经过10多的不断努力与开拓进取，辉骏生物已经拥有一支经验丰富、优秀刻苦的蛋白质组学实验及蛋白核酸互作技术队伍。公司各类实验的技术人员均有着深厚的理论基础和丰富的实验经验。本公司秉承着严谨科学、优质高效、不断完善的服务理念，以蛋白质组学为中心，函括各类蛋白核酸互作、分子生物学、抗体测序等实验。面向生物医药企业、院校、科研机构、医院和个人，为生物医药研发、生命科学和医学研究提供全方位蛋白质组学实验解决方案。目前，我们已经与中科院华南植物研究所、广州肿瘤医院、中山大学、浙江大学、武汉大学、上海海洋大学、西南大学、厦门大学等全国60多家科研单位建立了广泛的项目合作。
 

 　 感谢多年来广大客户对辉骏生物的支持与信任，我们将一如既往地为大家提供优质、高效、精准的各类包括蛋白质组学、核酸蛋白互作、分子\细胞生物学、免疫沉淀试剂盒、抗体测序等着方面实验技术服务。本着客户至上的理念，辉骏生物科技的所有员工将竭诚为您服务，按时按质地向您提供各类实验报告。
 

       欢迎登录公司网站：www.fitgene.com
       实验咨询：  400 699 1663