一文带你简单了解流式细胞术~

流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）从字面意义理解，Flow——Fluid、Cyto——Cell、Metry——Measurement，流式细胞术指的就是检测流动细胞的一种技术，能在细胞流动的状态下，快速检测细胞或颗粒物的特异性指标。它是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，具有速度快、精度高、准确性好等优点，成为当代最先进的细胞定量分析技术。
 
                                                               基本原理
流式细胞术用到的仪器叫流式细胞仪（Flow cytometer ），是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量，并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。目前广泛应用于外周血细胞的免疫表型分析、凋亡分析和细胞因子的检测。
在一定的压力下，鞘液带着细胞或者微粒通过喷嘴中心进入到流式照射室，在流式照射室的分析点，激光照射细胞并发生散射和折射，发射出散射光，同时被荧光标记的颗粒发射出荧光。散射光和荧光分别被不同的检测器接收，通过光电倍增管将检测到的荧光信号转换成电信号，这些电信号放大后再经过数据化处理输入电脑，供我们进行分析。
                    
                                         
                                                       流式细胞仪工作原理

                                                               流式通道
流式通道主要可以分为散射光通道和荧光通道。
流式细胞仪中能测定两种方向的散射光信号，即FSC（前向角散射）和SSC（侧向角散射）。
FSC的值代表细胞的大小：细胞体积越大，其FSC值就越大。所以可以利用细胞的FSC值初步比较细胞的大小，利用FSC值对细胞进行分群和分类。
SSC的值代表细胞的颗粒度：细胞越不规则，细胞表面的突起越多，细胞内能够引起激光散射的细胞器或者颗粒性物质越多，其SSC值就越大。所以可以利用细胞的SSC值初步比较细胞的颗粒度，利用SSC值对细胞进行分群和分类。
因此，根据不同的 FS 和 SS 可将这些细胞分成不同的细胞群。样品细胞不需要标记任何荧光素偶联抗体，直接上样分析就可以得到样品细胞的FSC值和SSC值，其值代表的是细胞的大小和颗粒度这两个基本的物理特征，所以样品的FSC-SSC散点图又称为样品细胞的 “物理图”。
荧光通道表示的不是细胞特有的物理特征，而是其化学特征。与根据 FS 和 SS 区分细胞群类似，可根据是否表达特定蛋白区分细胞。这种情况下，通常使用荧光染料对目标蛋白进行染色。用于检测目标蛋白的荧光染料被相应激发波长的激光激发后会发射荧光。这些被荧光染色的细胞或颗粒会被单独检测。荧光通道接收到的信号越强，表示细胞上结合的荧光素越多，那么细胞表面表达的该CD分子就越多，因此可根据荧光信号的强弱判断细胞表达该CD分子的相对数量。
 
 
 
                                                              常见流式图

-流式直方图-
流式直方图本质上就是统计直方图，是累积显示细胞量非常大而统计区间又非常小的统计直方图。横坐标代表荧光信号或散射光信号的相对强度，可以是线性或对数坐标；一般是相对细胞数。
 
-流式散点图-
散点图十分利于两参数图，而两个参数分别分布在x轴和y轴上，并且细胞计数以密度（点）图或轮廓图的形式显示，可显示其频率分布，同时也可以不同的颜色以标识给定位置的单元格密度。当用象限标记将散点图分为四个部分时，在直方图理解的基础上，可知右上象限表示荧光标记均为阳性或双阳性细胞，而左下象限则恰恰是显示两个标记均为负的细胞，左上象限和右下象限则分别代表只对y轴参数或x轴参数标记为正的细胞。

-等高线图-
流式等高线图的意义和实际应用与流式散点图较为相似，可以看作是流式散点图的一个变体。相比之下，流式散点图更为直观，所以应用也更为广泛。当然，流式等高线图也有其自身的优点，它较能直观地体现细胞群的集中点，等密度环线的中央区域代表一个细胞群的集中点，一般代表一个细胞群，所以在某些情况下，流式等高线图比流式散点图更能直观地体现细胞的分群。
 
 
 
                                                                     应用
一、流式细胞术可以用来检测细胞表面以及胞内的各种标志，对细胞进行分群鉴定以及各种蛋白表达量高低的比较。不仅仅是免疫细胞，其他的如肿瘤细胞、成纤维细胞、干细胞等都可以用流式细胞术进行检测分析和分选。
    二、通过标记Ki67、BCL-2、caspases等增殖及凋亡相关基因，流式细胞术可用来检测细胞的增殖以及凋亡。
    三、流式细胞术可用来分析细胞周期。细胞核DNA含量随着细胞增殖周期时相的不同而发生变化，用DNA染料进行染色，DNA含量多，荧光信号强，DNA含量少，荧光强度低。在肿瘤学研究中尤其常用，可以用于判断药物对肿瘤细胞影响、肿瘤的生长速度等。
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