X-Gluc拟南芥的GUS染色

x-gluc是检测大肠杆菌中uidA基因（β-葡萄糖苷酶基因β-glucuronidase, GUS）的底物。Gus 基因作为一种报告基因，在植物遗传转化研究中有广泛的用途。Gus基因来自于大肠杆菌，编码β-葡聚糖苷酶（一种水解酶），可催化底物5-溴-4-氯-3-吲哚葡聚糖醛酸苷（5-bromo-4-chloro-3-indolyl-glucronide，缩写为X-Gluc）分解，产生肉眼可见的深蓝色化合物，借此用来观察转基因植物中外源基因的表达情况，鉴定转基因植株。
本品以X-GLUC的环已胺盐形式提供。CAS 114162-64-0,达到分子生物学和植物转化研究级别。粉末形式提供，可溶于DMF配置20mg/ml储存液中，低速涡旋充分溶解，避光低温保存。
GUS染色步骤：
1.取材：将叶片、花瓣、根茎等组织剪成小片，放于1.5ml离心管中。
注：用于染色的植物材料的制备方法要因涉及的特定组织和器官的不同而异。例如，拟南芥的根、花和叶片以及烟草幼苗的根就可以不作任何预处理而直接染色。但是像烟草和马铃薯这些植物的茎和叶就必须在染色前切成薄片（1-3mm）。当操作大的组织和样品时，可以选用真空渗入法来帮助底物渗入细胞。
2.染色：加入适量配制好的GUS染色工作液至完全覆盖材料；锡箔纸包好后摇床摇动10分钟或更长时间至材料出现蓝色。注意要做阴性和阳性对照实验。
3.洗脱：将材料转入无水乙醇或80%丙酮中脱色2-3次，至阴性对照材料为白色。GUS染色阳性的蓝色斑点很稳定，在酒精中不褪色。
4.观察：一般染色后，GUS染色阳性的蓝色斑点肉眼就能看到。但是有些材料可能蓝色斑点很细微，要在显微镜下才能看到。


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