杂交瘤细胞株复苏扩大 实验过程及注意事项

                 杂交瘤细胞株复苏扩大

实验过程及注意事项

邮寄活细胞时：收到细胞后直接将一支细胞转到一个24T孔，放37℃co₂培养箱中培养过夜。约80%满时扩大。加入等体积培养基(17%HT培养基)，吹打细胞面，将细胞完全吹落下来，混匀并扩至3-4孔饲养细胞孔，每孔补加新的培养基。

邮寄冻存细胞时：预先用17%胎牛血清DMEM培养基铺好饲养层细胞，铺好后2-7天均可以使用，饲养层良好的状态是饲养细胞由圆形变为菱形，三角形等形状。收到冻存细胞后，取出一管细胞后迅速放至37℃水中融化，完全融化后1000转离心3分钟，弃上清，用600ul17%HT培养基悬浮，转至24孔培养板中，放至co₂培养箱中培养。

细胞冻存：细胞长至80%满时将孔内细胞上清弃掉，使用移液枪将500ul冻存液吹打细胞面，动作轻柔，转至细胞冻存管，放入冻存盒，并转至-80冰箱，过夜后即可转入液氮保存。

细胞复苏：预先用17%胎牛血清DMEM培养基铺好饲养层细胞，铺好后2-7天均可以使用，饲养层良好的状态是饲养细胞由圆形变为菱形，三角形等形状。从液氮内取出一管细胞后迅速放至37℃水中融化，完全融化后1000转离心3分钟，弃上清，用600ul17%HT培养基悬浮，转至24孔培养板中，放至co₂培养箱中培养。

注意事项：

   1.进入操作台前所用任何物品须经酒精擦拭消毒，以防污染。

   2.移液枪使用时不要靠近火焰，使用前应多换气。

   3.配置好的培养基放置4℃三天内可以使用。

   4.细胞传代与细胞复苏所用培养基应于实验前一小时拿出，恢复至室温方可使用。

   5.所需培养基和冻存液用之前进行无菌检验，以防污染。                 培养基：DMEM培养基+17%胎牛血清+HT

细胞冻存液：DMEM培养基：胎牛血清：DMSO=8：2：1

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