【样本处理步骤】
(一)花生,玉米,大米,小麦及其制品,植物油脂和饲料
┅┅取25g粉碎的样品(植物油脂直接取样,无需处理)与125mL甲醇-水(7:3)溶液混合;
┅┅加入5.0g氯化钠以均质器高速搅拌,提取2分钟;
┅┅4000r/min离心5min或用槽纹滤纸过滤;
┅┅取15mL滤液并加入30mL水稀释,用玻璃微纤维滤纸过滤,取稀释后液体待测;
┅┅将免疫亲和柱连接于20.0mL玻璃注射器下。准确移取15.0mL样品提取液注入玻璃注射器;
┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约6mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱,直至2~3mL空气通过柱体;
┅┅以10.0mL水淋洗柱子2次,弃去全部流出液,并使2mL~3mL空气通过柱体;
┅┅准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱,流速为1 mL/min ~2mL/min,收集全部洗脱液于玻璃试管中,供检测用。
(二)酱油
┅┅取50g试样与100mL甲醇-水(8:2)溶液混合;
┅┅加入2.5g氯化钠以均质器高速搅拌,提取1分钟;
┅┅4000r/min离心5min或用槽纹滤纸过滤;
┅┅取10mL滤液并加入40mL水稀释,用玻璃微纤维滤纸过滤
┅┅取稀释后液体待测;
┅┅将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL样品提取液注入玻璃注射器;
┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约6mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱,直至2~3mL空气通过柱体;
┅┅用10.0mL 0.1%的吐温/PBS清洗,再以10.0mL水淋洗柱子2次,弃去全部流出液,并使2mL~3mL空气通过柱体;
┅┅准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱,流速为1 mL/min ~2mL/min,收集全部洗脱液于玻璃试管中,供检测用。
(三)食醋
┅┅取5g试样,加入1.0g氯化钠;
┅┅以pH7.0磷酸盐缓冲溶液稀释定容至25.0mL;
┅┅4000r/min离心5min或用槽纹滤纸过滤;
┅┅取10mL滤液并加入10mL水稀释,用玻璃微纤维滤纸过滤
┅┅取稀释后液体待测。
┅┅将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL样品提取液注入玻璃注射器;
┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约6mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱,直至2~3mL空气通过柱体;
┅┅用10.0mL 0.1%的吐温/PBS清洗,再以10.0mL水淋洗柱子2次,弃去全部流出液,并使2mL~3mL空气通过柱体;
┅┅准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱,流速为1 mL/min ~2mL/min,收集全部洗脱液于玻璃试管中,供检测用。
【结果判定】
经免疫亲和柱净化后,收集到的甲醇洗脱液可直接使用荧光计或者HPLC检测,也可使用薄层色谱或者酶联免疫试剂盒进行检测。收集到的1mL洗脱液中的黄曲霉毒素B1含量相当于1g样品中黄曲霉毒素B1含量。
【高效液相参考谱图】
【注意事项】
┅┅黄曲霉毒素危害极大,应戴手套操作。
┅┅使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液最好用5%浓度次氯酸钠溶液浸泡过夜。
┅┅不要使用过了有效日期的免疫亲和柱
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