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ApoTome荧光影像杂光消除系统
有效消除较厚荧光样本非焦面杂光,使影像澄清。
可做光学切片,3D重组。
On-line获得澄清影像。
轻易切换传统荧光及澄清化荧光撷取两种模式。
适用于Zeiss最高阶正立与倒立显微镜。
荧光标定为研究细胞学与分子生物学十分重要及普遍的方法,然而传统的显微荧光撷取往往无法克服非焦距面杂光的干扰,导致影像模糊不清而无法获取精确的信息。此现象尤其发生于以高倍率高解析力物镜观察较厚之荧光样本时。因高倍率高解析力物镜之景深较薄,仅约1um,但样本之厚度往往大于1um,若落于景深范围外(非焦距面)的荧光样本所产生之杂光无法消除,不但会干扰焦距面荧光影像的观察,且进一步地阻碍后续3D影像重组与3D影像量测的进行
目前较广为人知的消除非焦距面杂光的方式有两种:其一为共轭焦显微镜,以pinhole的控制阻挡非焦面杂光进入影像撷取系统;其二为3D deconvolution,依点扩散函数(point spread function)原理,将已撷取之较模糊的荧光影像以软件运算方式处理,以获得澄清化的影像。前者效能卓越但十分昂贵,后者效能虽佳,但有软件运算费时甚久,无法及时获得影像之缺点。
‧ApoTome为Zeiss于2002年底正式推出之荧光影像非焦面‧”Apo”为顶级之光学,”Tome”为切片之意,ApoTome”即意指顶级之光学切片。
‧此系统结合特殊硬件装置与软件运算的方式,达到实时的澄清化荧光影像撷取。
‧硬件方面包括一内含光栅之滑板及其控制器,软件则包含硬体的操控界面与撷取影像的运算程序。
使用时将此光栅滑板推入荧光光路中视野光圈的位置,使光栅正确投影于样本的焦距面,再以控制器控制三段光栅位置,以数字影像系统撷取三段光栅位置投影之影像后,立即经软件的运算获得消除非焦距面杂光之澄清化影像,光学切片厚度可达1 Airy,有助于后续3D影像重组与3D影像量测实验的进行。
ApoTome可装置于Zeiss顶级正立荧光显微镜Axio Imager D2、Z2及倒立荧光显微镜Axio Observer D1、Z1,方便现有之Zeiss显微镜升级。可使用传统荧光光源(汞灯或氙灯),不需使用昂贵的雷射灯管,研究者可以最经济的成本获得消除荧光影像非焦面杂光的功能。另由于软件运算时间大大地减少(130万画素仅需约100ms),且不必要撷取Z轴堆栈影像即可做澄清化的运算处理,研究者得以迅速判断所撷取影像的样本优劣,并迅速从中获得更精确的信息,大为提升研究的效率。应用领域广及细胞生物学、神经学、发育生物学、分子病理学、分子遗传学等。相关之荧光标定实验方法如蛋白质免疫荧光标定,染色体荧光原位杂交,自发性荧光蛋白质标定等研究,皆可应用ApoTome而获得澄清化的荧光影像撷取与更精确的判读。