核酸快速银染试剂盒

特别提示：包括核酸快速银染试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：核酸快速银染试剂盒
英文名称：Fast Silver Stain Kit for Nucleic Acids
产品货号：RFT206
产品规格：25次

核酸快速银染试剂盒是一种快速简单、可用于聚凝胶中的核酸检测的试剂盒。其检测原理是：银离子(Ag+）可与核酸形成稳定的复合物，随后Ag+在碱性环境下被还原剂如甲醛还原成银颗粒，后者通过显色可把核酸电泳条带染成黑褐色。该方法检测灵敏度比EB高达200倍，能检测到10ng的DNA条带，常用于检测SSR标记、SNP标记等。
本试剂盒可足够用于25块常规的8×10cm凝胶的银染。
产品组份：
 

组分	规格	保存条件
染色增敏液（10×）	250mL	RT，用前按照标签加入无水乙醇
染色加速液（10×）	250mL	RT
银溶液(100×)	26 mL	RT，避光
基本显色液(10×)	250mL	RT
显色加速液(500×)	5mL	RT，避光

保存条件：
常温保存，开封后一年有效。

注意事项：
1、由于银染非常灵敏，操作时请尽量使用高纯度的水，并确保所使用器皿非常清洁，最好使用洁净的玻璃器皿。操作时必须戴手套，避免皮肤和凝胶直接接触。
2、需自备无水乙醇及MilliQ级纯水。
3、下述使用说明中各种溶液的使用量适用于大小为8×10cm厚度为0.75-1mm的凝胶。对于更大的凝胶，各种溶液使用量需按凝胶面积的比例放大，对于更厚的凝胶，作用时间需按照厚度比例适当延长。
4、本说明书所指的常温温度为20-25℃，操作温度较低时由于溶液的扩散能力下降，各步骤需适当延长时间。
5、银染基本显色液(10×)在低温环境下可能会出现沉淀，可在30-37℃水浴中溶解，充分混匀后使用。
使用方法：
一、漂洗步骤：
电泳结束后，凝胶中加入100ml MilliQ级纯水，在摇床上常温摇动2分钟，摇动速度为60-70rpm；重复此步骤1次。
二、银染步骤：
1、银染：
弃水，加入100mL即用型染色液，在摇床上常温摇动5分钟，摇动速度为60-70rpm。
 

即用型染色液配制量 100mL
超纯水	79mL
染色增敏液（10×）	10mL
染色加速液（10×）	10mL
银溶液(100×)	1mL

【注】：
● 即用型染色液配制后需在20分钟内使用。
2、水洗涤：
弃原有溶液，加入100mL MilliQ级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动15-20秒，摇动速度为60-70rpm。
【注】：
● 水洗涤的时间不能超过20秒。
三、显色步骤：
弃水，加入100mL银染显色液，在摇床上室温摇动3-10分钟，直至出现比较理想的预期核酸条带，摇动速度为60-70rpm。
 

银染显色液配制量 100mL
超纯水	89.8 mL
基本显色液(10×)	10mL
显色加速液(500×)	0.2mL

【注】：
● 银染显色加速液(500×)有刺激性气味，建议在通风橱内操作；
● 银染显色液配制后需在20分钟内使用。
四、终止步骤：
弃银染显色液，加入100mL MilliQ级纯水，在摇床上常温摇动3-5分钟，摇动速度为60-70rpm。
五、保存：
可在MilliQ级纯水中保存；或采用适当的方式制备成干胶。
常见问题：
● 背景太深：
（1）显色时间过长。通常显色反应会在10分钟内结束，显色反应时间过长会导致背景很深。
（2）水的纯度太低。需使用大于16MΩ·cm的高纯度水。
● 核酸条带非常浅：
（1）银染后水洗涤时间过长。在银溶液染色时需严格控制水洗涤的时间，水洗涤时间不能超过20秒，否则会导致过多的银离子被洗去，导致检测灵敏度下降。
（2）核酸银染显色加速液（500×）失效。核酸银染显色加速液（500×）不能低温保存，低温保存会导致加速液失效。
● 凝胶上出现小点或其它非核酸的痕迹：
（1）凝胶没有充分被溶液浸没。请注意选择大小合适的容器，并加入足量的各种溶液，同时需保持适当的混匀速度确保凝胶可以被溶液浸没。
（2）用于银染的容器没有充分洗涤干净。容器需先用洗涤剂充分洗涤，随后用自来水充分冲洗，最后用高纯度水再洗涤数次。该容器最好能专用于银染，并注意避免各种可能的污染。
（3）指纹或其它压痕。请注意戴手套操作，切勿直接接触皮肤。操作时请注意尽量勿挤压、折叠或摩擦凝胶。
（4）有金属物质接触凝胶。金属物质例如金属镊子等接触凝胶会出现非特异性痕迹。

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名称：一站式RNA电泳套装
货号：BTN60904
规格：10次
本品是包括琼脂糖、去离子甲醛、RNA上样液、电泳液等在内的RNA电泳套装，专门用于RNA电泳分析。可以进行至少10次mini变性胶电泳。

产品特点：
1. 即开即用，用户不需要自己进行RNase 灭活、高压灭菌、pH调节等操作。
2.与Northern杂交等后续反应兼容。

产品组成：
 

成分	规格
琼脂糖	5g
超纯水	250ml
甲醛	60ml
RNAload(含EB)	0.5ml
RNAep，10×	100ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，但收到货后RNAload 需要4℃保存，RNAep，10×一旦打开需要-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意：所有器皿(三角瓶，电泳槽，枪头等)均需去除RNase。强烈推荐使用本公司的超强无毒的固相RNase 清除剂。

一、配制琼脂糖甲醛变性胶(1.2%，100mL)
1.在三角瓶中加入下列成份：琼脂糖 1.2-1.5g；DEPC水 87mL
2. 将琼脂糖加热融化后，加入10mL 10×RNAep(10×RNAep 就是10×MOPS缓冲液，其瓶子一旦打开，就很容易产生污染细菌，细菌大量繁殖后会释放大量 RNase，所以剩下的10×RNAep 最好-20℃放置)。
3. 待胶冷却至 60℃左右，再加下列成份：甲醛 3.0mL；自备EB(10mg/mL)2-4μL
注意：由于本试剂盒提供的RNAload中含EB，所以也可以不加EB，但效果较差。如果使用自备的其他染料，如SYBR Green I，则不能同时使用其他染料，包括含EB的RNAload，用户需要另购不含EB的RNAload)。
4. 混匀后倒胶，凝固半小时后即可以使用。

二、配制电泳液
5. 将RNAep 用DEPC 水稀释十倍后即成电泳液，所需要的体积根据使用的电泳槽决定。

三、变性RNA样品
6.在一干净的离心管中将5-10μL RNA和15μL RNAload 混合，50-60℃保温10分钟后冰浴5-10分钟，直接上样。注意：每一泳道至多可分析30μg RNA，通常用10-20μg 总RNA进行Northern杂交，可以检测高丰度mRNA(占mRNA 总量的0.1%以上)；如待测RNA含量极微，每个泳道需加0.5-3.0μg poly(A)+ RNA。

四、电泳
7.电泳时，将凝胶预电泳5 min(电压为5 V/cm)。随后加样品和分子量对照(如果有的话)，以3－4 V/cm的电压电泳，直至染料迁移至胶下游的3/4处。
8.电泳结束后，在300nm 紫外灯下拍照。

五、后续处理
9. 按标准方法进行Northern杂交等后续处理。

使用效果：

图注: 用本产品电泳兔全血总RNA效果图。10μL 总RNA与15μL RNAload 混合后在甲醛琼脂糖变性胶上电泳0.5小时，直接在紫外灯下观察并照相。

疑难解答：
Q：RNA电泳为何最好使用RNAep，不要使用DNA电泳液TAE或TBE？
A：一是因为RNAep 经过去RNase处理，而一般实验室使用的TAE或TBE都没有经过去RNase处理，故极有可能含RNase，使样品RNA 降解。即使要灭活TAE或TBE中的RNase 也十分麻烦，因为DEPC 不能处理含Tirs的缓冲液；二是TEB含有硼酸，硼酸是研究多羟基醇和糖的经典试剂，它能与RNA中含多羟基的核糖反应生成糖硼酸络合物，故电泳时RNA 带型十分弥散。在一定浓度范围内，RNA分子间还能通过硼酸形成分子间复合物，出现电泳时各种RNA以一条带的形式出现的现象。所以RNA电泳时要避免使用含硼酸的缓冲液。使用TAE效果虽然比TBE 稍好，但文献报道(BioTechniques 2000，28:414-415)，它不能分离某些大小不同的RNA分子。
Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组DNA 吗？
A：不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基互补或通过硼酸络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使RNA变性。
使用百奥莱博优化的上样/变性/染色三用溶液RNAload可以使RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用TAE或超快电泳液SuperBuffer-2，最好不要使用TBE缓冲液，因为TBE中的硼酸能与RNA的多羟基形成复合物，RNA 很难形成锐利的条带。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA去除剂DNAScavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。
Q：为何我的植物RNA样品有4-5 条带？
A：部分植物组织有叶绿体等质体，而叶绿体有核糖体，所以也有其rRNA。
叶绿体的rRNA跟细胞浆里面核糖体的rRNA大小不同，所以一般会多出两条带(共4 条rRNA 条带)。小的tRNA和5S rRNA 有时可见，有时不可见，取决于回收效率。

北京百奥莱博科技有限公司一家专注于生命科学研究领域的生物技术公司，坚持“质量至上，服务为本，全心全意助力生命科学”的理念，为广大用于提供稳定、可靠、专业的产品和服务支持，产品线包括分子生物学，细胞生物学，免疫检测，抗体，重组蛋白，血液制品等系列。“忙忙碌碌的平凡，铸就事业的不凡”。让我们携起手来，共同创造生命科学的蓬勃发展。